Wnt/β-catenin信号通路抑制剂MSAB对人子宫内膜基质细胞纤维化反应的影响

摘要

目的：探讨Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路抑制剂3-（4-甲基苯基磺酰胺基）苯甲酸甲酯（MSAB）对人子宫内膜基质细胞（HESCs）纤维化反应的影响，为MSAB应用于宫腔粘连（IUA）靶向治疗提供依据。方法：体外培养正常HESCs，分为对照组和转化生长因子β1（TGF-β1）组；体外培养IUA患者粘连部分的HESCs，作为IUA组。采用Western blotting法检测TGF-β1作用不同时间（0、 12、 24、 48和60h）后各组细胞中纤维化标志蛋白Ⅰ型胶原α1（COL1A1）蛋白表达水平。采用MTT实验检测各组细胞增殖活性。采用Western blotting法检测对照组和IUA组细胞中细胞COL1A1、间质标志蛋白[N-钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）]以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin表达水平。根据MSAB浓度，将正常HESCs分为0（对照组）、 0.25、 0.50、 0.75和1.00μmol·L^-1 MSAB组，MTT实验检测各组细胞存活率。MSAB作用后，将正常HESCs分为对照组（正常HESCs）、 TGF-β1组(10μg·L^-1 TGF-β1诱导正常HESCs 24 h后撤药，更换为完全养基并继续培养24 h)和MSAB组(10μg·L^-1 TGF-β1诱导正常HESCs 24 h后撤药，更换为含0.75μmol·L^-1 MSAB的完全培养基并继续培养24 h)。采用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）法检测各组细胞中上皮-间质转化（EMT）相关转录因子Snail、Slug、Smuc、 ZEB1和ZEB2和COL1A1mRNA表达水平，采用Westernblotting法检测各组细胞中COL1A1蛋白、 N-钙黏蛋白、 α-SMA蛋白、 β-catenin和c-myc蛋白表达水平。结果：与对照组（TGF-β1作用0 h）比较，TGF-β1组作用12、24、48和60 h时HESCs中COL1A1蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较，IUA组和TGF-β1组HESCs增殖活性差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，IUA组HESCs中COL1A1、β-连环蛋白、N-钙黏蛋白和α-SMA蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较，0.75和1.00μmol·L^-1 MSAB组细胞存活率降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较，TGF-β1组细胞中Snail、Slug和COL1A1 mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）；与TGF-β1组比较，MSAB组细胞中Snail、Slug和COL1A1 mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较，作用24 h时TGF-β1组细胞中COL1A1蛋白、N-钙黏蛋白、 α-SMA蛋白、 β-catenin和c-myc蛋白表达水平升高（P<0.01）；与TGF-β1组比较，MSAB组细胞中COL1A1蛋白、 N-钙黏蛋白、 α-SMA蛋白、β-catenin和c-myc蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结结论论：MSAB可抑制体外培养HESCs的纤维化反应，该结果为MASB应用于IUA靶向治疗提供了理论基础。

关键词

子宫内膜纤维化 / 转化生长因子β1 / 上皮-间质转化 / Asherman综合征 / 宫腔粘连