肌肽通过AMPK/mTOR信号通路抑制自噬对氧糖剥夺/复糖复氧诱导星形胶质细胞损伤的保护作用

摘要

目的：探讨肌肽（CAR）对氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）诱导的星形胶质细胞（AS）损伤的改善作用，并阐明其可能的作用机制。方法：将AS分为对照组、模型组（OGD/R组）、OGD/R+CAR组（CAR组）和OGD/R+CAR+腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激活剂AICAR组（CAR+AICAR组）。MTT法和绿菁染色检测各组AS存活率和绿菁染色阳性细胞率，AnnexinⅤ-FITC/PI法流式细胞术检测各组AS凋亡率，Western blotting法检测各组AS中AMPK、磷酸化AMPK (p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化mTOR (p-mTOR)、微管相关蛋白轻链3B (LC3B)、Beclin-1和P62蛋白表达水平，免疫荧光染色法观察各组AS中LC3B阳性荧光强度。结果：与对照组比较，OGD/R组AS存活率和绿菁染色阳性细胞率明显降低（P<0.01）,AS凋亡率明显升高（P<0.01）, AS中p-AMPK/AMPK和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值及Beclin-1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,p-mTOR/mTOR比值及P62蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与OGD/R组比较，CAR组AS存活率和绿菁染色阳性细胞率明显升高（P<0.01）,AS凋亡率明显降低（P<0.01）,AS中p-AMPK/AMPK和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值及Beclin-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,p-mTOR/mTOR比值和p62蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与CAR组比较，CAR+AICAR组AS存活率和绿菁染色阳性细胞率明显降低（P<0.01）,AS凋亡率升高（P<0.01）、AS中p-AMPK/AMPK和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值及Beclin-1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,p-mTOR/mTOR比值和P62蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。LC3B免疫荧光染色结果与Westernblotting法检测结果趋势一致。结结论论：CAR对OGD/R所致AS损伤具有保护作用，其作用机制可能与抑制AMPK/mTOR信号途径，进而抑制细胞自噬有关。

关键词

肌肽 / 自噬 / 星形胶质细胞 / 腺苷酸活化蛋白激酶 / 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

基金资助

辽宁省教育厅面上项目（2021LJKZ0823）