沉默CDC20基因通过抑制Wnt/β-连环蛋白信号通路对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的影响

摘要

目的：探讨细胞分裂周期蛋白20 （CDC20）对子宫内膜癌（EC）细胞增殖和细胞周期的影响，并阐明其作用机制。方法：实时荧光定量PCR （RT-qPCR）和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞（KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞）中CDC20 mRNA及蛋白表达水平，选择RL95-2细胞用于后续实验。将CDC20 shRNA干扰慢病毒转染至RL95-2细胞中，分为对照组、sh-NC组（感染阴性对照慢病毒）、sh-CDC20组（感染CDC20 shRNA干扰慢病毒）、sh-NC+SM04690组(感染阴性对照慢病毒后，加入64 nmol·L^-1 Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂SM04690干预48h)和sh-CDC20+SM04690组(感染CDC20shRNA干扰慢病毒后，加入64 nmol·L^-1 SM04690干预48 h)。RT-qPCR法和Western blotting法检测不同细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平，CCK-8法检测各组细胞增殖活性，BrdU法检测各组细胞中BrdU阳性细胞百分率，流式细胞术检测各组G2/M期细胞百分率，Western blotting法检测各组细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平。结果：与T-HESC细胞比较，KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），其中RL95-2细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平最高。与sh-NC组比较，sh-CDC20组和sh-NC+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低（P<0.05）,G2/M期细胞百分率明显升高（P<0.05），细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与sh-CDC20组比较，sh-CDC20+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低（P<0.05）,G2/M期细胞百分率明显升高（P<0.05），细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：EC细胞中CDC20呈高表达，沉默CDC20可能通过调控Wnt/β-连环蛋白信号转导诱导RL95-2细胞G2/M期阻滞，抑制细胞增殖。

关键词

子宫内膜癌 / 细胞分裂周期蛋白20 / 细胞周期 / 细胞增殖 / Wnt/β-连环蛋白信号通路