5-Aza-CdR对裸鼠皮下移植瘤组织中甲状腺乳头状癌细胞自噬和凋亡的影响及其机制

摘要

目的：探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对裸鼠皮下移植瘤组织中TPC-1细胞自噬和凋亡的影响，并阐明其作用机制。方法：16只BALB/c雌性裸鼠右前腋下接种人甲状腺乳头状癌（PTC） TPC-1细胞建立移植瘤模型。成瘤后裸鼠随机分为对照组和实验组，每组8只，对照组裸鼠腹腔注射生理盐水，实验组裸鼠腹腔注射5-Aza-CdR，隔日给药1次，连续给药4周。观察2组裸鼠移植瘤生长情况，末次给药后处死裸鼠，称瘤体质量。HE染色观察2组裸鼠移植瘤组织病理形态表现，免疫组织化学染色检测2组裸鼠移植瘤组织中微管相关蛋白轻链3 (LC3)、B细胞淋巴瘤-2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平，实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组裸鼠移植瘤组织中LC3、Beclin-1、Bcl-2、Bax、细胞外信号调节激酶激酶（MEK）、细胞外信号调节激酶1 (ERK1)、细胞外信号调节激酶2 (ERK2)、磷酸化ERK1 (p-ERK1)、磷酸化ERK2(p-ERK2) mRNA和蛋白表达水平，并计算Bax/Bcl-2比值。结果：与对照组比较，实验组裸鼠移植瘤体积和质量明显降低（P<0.01）。对照组裸鼠癌细胞数量多，排列紧密，细胞形状不规则，细胞核染色清晰，细胞核大，细胞有重叠和分叶，可见明显的病理性核分裂象，符合PTC病理特点；实验组裸鼠癌细胞数目明显减少，排列稀疏，细胞核固缩且胞核不明显，结缔组织明显增多。与对照组比较，实验组裸鼠移植瘤组织中LC3B和Beclin-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05或P<0.01）,MEK、ERK1/2及p-ERK1/2 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。结结论论：5-Aza-CdR可抑制裸鼠皮下移植瘤组织中TPC-1细胞生长，诱导移植瘤细胞自噬并促进细胞凋亡，其机制可能与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/MEK/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路抑制有关。

关键词

甲状腺乳头状癌 / 细胞自噬 / 细胞凋亡 / 移植瘤 / 5-氮杂-2'-脱氧胞苷