大黄酚对H₂O₂诱导EA.hy926细胞凋亡的改善作用及其机制

摘要

目的：探讨大黄酚对过氧化氢（H₂O₂）诱导EA. hy926细胞氧化损伤的作用，并阐明其对支气管肺发育不良（BPD）的治疗作用及其相关机制。方法：分别采用25、50、100、200、400、800和1 600μmol·L^-1 H₂O₂及0、8、16、32、64、128和256μmol·L^-1大黄酚诱导EA. hy926细胞，CCK-8法检测不同浓度H₂O₂和大黄酚处理后EA. hy926细胞活性。将细胞分为对照组、模型组(200μmol·L^-1H₂O₂)、低剂量大黄酚组(8μmol·L^-1大黄酚和200μmol·L^-1 H₂O₂)和高剂量大黄酚组(256μmol·L^-1大黄酚和200μmol·L^-1 H₂O₂)。Western blotting法检测各组细胞质和细胞核中凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达水平，免疫荧光法检测各组细胞AIF核转位情况，试剂盒检测各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-8及Caspase-9水平。结果：不同浓度H₂O₂作用下，EA. hy926细胞呈倒置S形细胞活性曲线，细胞活性良好，半数抑制浓度（IC50）为261.52μmol·L^-1，采用200μmol·L^-1 H₂O₂干预24 h诱导建立细胞模型。随着大黄酚药物浓度升高，EA. hy926细胞活性无明显变化（P>0.05），采用8和256μmol·L^-1大黄酚进行细胞干预。Western blotting法检测，与对照组比较，模型组细胞核中AIF蛋白表达水平明显升高（P<0.05），细胞质中AIF蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，低和高剂量大黄酚组细胞核中AIF蛋白表达水平均明显降低（P<0.05），细胞质中AIF蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）。免疫荧光法检测，对照组细胞AIF定位于细胞核内较少；与对照组比较，模型组细胞AIF核转位阳性值明显升高（P<0.05）；与模型组比较，低和高剂量大黄酚组细胞AIF核转位阳性值均明显降低（P<0.05）。与对照组比较，模型组细胞中SOD活性明显降低（P<0.05）,MDA水平明显升高（P<0.01）；与模型组比较，低和高剂量大黄酚组细胞中SOD活性均明显升高（P<0.05）,MDA水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）；各组细胞中Caspase-8和Caspase-9水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：大黄酚通过抑制氧化应激和AIF核转位改善H₂O₂诱导的EA. hy926细胞凋亡，有助于治疗BPD。

关键词

大黄酚 / 支气管肺发育不良 / 凋亡诱导因子 / 核转位 / 细胞凋亡 / 氧化应激