过表达SLC7A5基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制

摘要

目的：探讨过表达溶质载体家族7成员5 (SLC7A5)基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响，并阐明其相关机制。方法：4只3周龄SPF级SD雌性大鼠，提取原代大鼠卵巢颗粒细胞，分为阴性对照组（NC组）和促卵泡激素受体（FSHR）染色组（FSHR组）。免疫荧光染色法观察大鼠卵巢颗粒细胞中FSHR蛋白表达情况，鉴定原代大鼠卵巢颗粒细胞是否成功分离。将大鼠卵巢颗粒细胞分为对照组（转染空载体质粒）和OE-SLC7A5组（转染SLC7A5过表达质粒），采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法验证细胞转染效率。流式细胞术检测2组卵巢颗粒细胞凋亡率，流式细胞术检测2组不同细胞周期卵巢颗粒细胞百分率，RT-qPCR法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8和肿瘤坏死因子α (TNF-α) mRNA表达水平，Western blotting法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-8、cleaved Caspase-8和TNF-α蛋白表达水平。结果：荧光显微镜下卵巢颗粒细胞呈长梭形或者不规则形，特异性表达FSHR,NC组未见FSHR绿色荧光表达，FSHR组可见FSHR绿色荧光表达，提示大鼠原代卵巢颗粒细胞成功分离。与对照组比较，OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中SLC7A5 mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），提示SLC7A5过表达质粒成功转染卵巢颗粒细胞。流式细胞术检测，与对照组比较，OE-SLC7A5组细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。与对照组比较，OE-SLC7A5组S期卵巢颗粒细胞百分率明显降低（P<0.05）。RT-qPCR法检测，与对照组比较，OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、 Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）。Western blotting法检测，与对照组比较，OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、Caspase-8、cleaved Caspase-8、Caspase-3、cleaved Caspase-3和SLC7A5蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）。结论：SLC7A5蛋白表达增加能够通过上调TNF-α、Caspase-8和Caspase-3凋亡通路表达，促进颗粒细胞凋亡。

关键词

溶质载体家族7成员5 / 大鼠卵巢颗粒细胞 / 细胞凋亡 / 肿瘤坏死因子α / 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3 / 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶8