一叶秋碱对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及其机制

摘要

目的:探讨一叶秋碱（SEC）对人结肠癌细胞系SW620细胞凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:将皮下移植肿瘤模型裸鼠分为对照组（n=6）、奥沙利铂（OXA）组（n=7）和SEC组（n=7）,检测各组裸鼠皮下移植瘤体积和质量并计算肿瘤抑制率。将不同剂量SEC (5～120μmol·L^-1)分别作用于SW620细胞12、24、48和72 h,细胞计数试剂盒8 （CCK-8）法检测各组细胞存活率,确定SEC最适药物剂量。将SW620细胞分为对照组、20μmol·L^-1SEC组、40μmol·L^-1 SEC组和40μmol·L^-1 OXA组。采用TUNEL染色法和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,JC-1染色法检测各组细胞线粒体膜电位,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光染色法和流式细胞术检测各组细胞中活性氧（ROS）水平,Western blotting法检测各组细胞中细胞色素C、B细胞淋巴瘤2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK （p-JNK）、丝裂原活化蛋白激酶p38、磷酸化p38 （p-p38）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）和磷酸化ERK （p-ERK）蛋白表达水平。结果:与对照组比较,SEC组裸鼠皮下移植瘤体积及质量明显减小（P<0.05或P<0.01或P<0.001）;SEC组和OXA组肿瘤抑制率分别为20.42%及6.50%。CCK-8法检测,与0μmol·L^-1 SEC比较,SEC剂量大于20μmol·L^-1时,SW620细胞存活率明显降低（P<0.001）;选定20μmol·L^-1 SEC、40μmol·L^-1 SEC和24 h作为细胞后续实验干预剂量及时间。TUNEL法检测,与对照组比较,20和40 mol·L^-1 SEC组细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.001）;流式细胞术检测,与对照组比较,40μmol·L^-1 SEC组细胞凋亡率明显升高（P<0.001）。JC-1染色法检测,与对照组比较,20和40μmol·L^-1 SEC组线粒体膜电位降低（P<0.001）。DCFH-DA荧光染色法检测,与对照组比较,20和40μmol·L^-1 SEC组及40μmol·L^-1 OXA组细胞中ROS水平明显升高（P<0.001）;流式细胞术检测,与对照组比较,40μmol·L^-1 SEC组细胞中ROS水平明显升高（P<0.05）。与对照组比较,20和40μmol·L^-1 SEC组及40μmol·L^-1 OXA组细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,细胞色素C和Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.001）。与对照组比较,20和40μmol·L^-1 SEC组细胞中p-JNK/JNK、p-p38/p38及p-ERK/ERK比值均明显升高（P<0.05或P<0.01或P<0.001）。结论:SEC可抑制SW620细胞增殖,增加细胞中ROS水平,降低细胞线粒体膜电位,诱导线粒体凋亡;其作用机制可能与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的调控有关。

关键词

一叶秋碱 / 结肠肿瘤 / 细胞凋亡 / 细胞增殖 / 活性氧