苦味受体T2R38激活对香烟烟雾暴露诱导人气道上皮NuLi-1细胞铁死亡的影响及其机制

摘要

目的:探讨苦味受体2型味觉受体（T2R） 38激活对香烟烟雾暴露诱导人气道上皮NuLi-1细胞铁死亡的影响,并阐明其可能的机制。方法:人气道上皮NuLi-1细胞分为对照组（不进行任何处理）、香烟提取物（CSE）组（5%CSE处理细胞24h）和CSE+T2R38特异性激动剂苯基硫脲（PTC）组（CSE+PTC组）(5%CSE和1 mmol·L^-1PTC处理细胞24h)。采用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）法和Western blotting法检测各组NuLi-1细胞中T2R38的mRNA及蛋白表达水平,细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测各组细胞活性,试剂盒检测各组细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型NOS（eNOS）和超氧化物歧化酶（SOD）活性,DAX-J2红色荧光探针法检测各组细胞中一氧化氮（NO）水平,荧光探针试剂盒检测各组细胞中ROS水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组细胞中丙二醛（MDA）、Fe²⁺和还原型谷胱甘肽（GSH）水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子红细胞2相关因子2 （Nrf2）和谷胱甘肽过氧化物酶4 （GPx4）蛋白表达水平。结果:与对照组比较,CSE组NuLi-1细胞中T2R38 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）。与对照组比较,CSE组NuLi-1细胞活性降低（P<0.05）,细胞中iNOS和SOD活性升高（P<0.05）,NO和ROS水平升高（P<0.05）,MDA和Fe²⁺水平升高（P<0.05）,细胞中GSH水平降低（P<0.05）,Nrf2和GPx4蛋白表达水平降低（P<0.05）。与CSE组比较,CSE+PTC组NuLi-1细胞活性升高（P<0.05）,细胞中SOD活性升高（P<0.05）,GSH水平升高（P<0.05）,细胞中iNOS活性降低（P<0.05）,NO和ROS水平降低（P<0.05）,MDA和Fe²⁺水平降低（P<0.05）,细胞中Nrf2和GPx4蛋白表达水平升高（P<0.05）。对照组、CSE组和CSE+PTC组细胞中eNOS活性比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:激活苦味受体T2R38可抑制香烟烟雾暴露诱导人气道上皮NuLi-1细胞铁死亡,其主要机制可能与降低细胞中iNOS活性有关。

关键词

慢性阻塞性肺疾病 / 人气道上皮细胞 / 苦味受体 / 2型味觉受体38 / 诱导型一氧化氮合酶 / 铁死亡