高浓度葡萄糖对体外Raw264.7巨噬细胞极化状态的影响

摘要

目的:探讨不同浓度葡萄糖对体外Raw264.7巨噬细胞极化的诱导作用。方法:将DMEM培养基培养的Raw264.7细胞分为对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、不同浓度高糖组(15.0、25.0、35.0和45.0 mmol·L^-1葡萄糖)和阳性对照组[脂多糖（LPS）],分别培养3、6和9h,观察各组细胞形态,细胞计数试剂盒8 （CCK-8）法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）法检测各组细胞中白细胞介素6 （IL-6）、肿瘤坏死因子α （TNF-α）和白细胞介素10 （IL-10） mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞上清中IL-6、TNF-α和IL-10水平,流式细胞仪检测各组细胞M1和M2型巨噬细胞标志物CD86+及CD163+细胞百分比。结果:对照组Raw264.7细胞贴壁生长,形态以圆形为主;35.0 mmol·L^-1高糖组和阳性对照组细胞拉长、伪足形成,呈现炎症性改变。与对照组比较,作用6、12、24和48 h后不同浓度高糖组细胞存活率均升高（P<0.05）。与对照组比较,作用3h后,35.0 mmol·L^-1高糖组细胞中IL-6和IL-10 mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,细胞上清中IL-6、TNF-α和IL-10水平无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）;作用6h后,35.0 mmol·L^-1高糖组细胞中TNF-α mRNA表达水平升高（P<0.001）,细胞上清中IL-6、TNF-α和IL-10水平明显升高（P<0.05或P<0.001）;作用3h后,35.0 mmol·L^-1高糖组巨噬细胞极化标志物CD86+和CD163+细胞百分比明显升高（P<0.01或P<0.001）。结论:一定高浓度葡萄糖可诱导体外Raw264.7巨噬细胞向M1亚型极化。

关键词

Raw264.7细胞 / 葡萄糖 / 炎症 / 巨噬细胞极化 / 炎症细胞因子