miR-34a-5p对颞叶癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响及其机制

摘要

目的：探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)对颞叶癫痫大鼠海马组织中神经元凋亡的影响，并阐明其作用机制。方法：52只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-34a-5p抑制剂组和抑制剂阴性对照组，每组13只。采用PONEMAH 6. X实验动物遥测平台记录各组大鼠脑电图，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平，HE染色观察各组大鼠海马组织形态表现，TUNEL法检测各组大鼠海马神经元凋亡率，免疫组织化学法检测各组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率，Western blotting法检测各组大鼠海马组织中细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白（p-Rb）和E2F转录因子1(E2F1)蛋白表达水平。结果：对照组大鼠无异常表现；模型组、miR-34a-5p抑制剂组和抑制剂阴性对照组大鼠出现不同程度流口水、颤抖、血泪、凝视和咀嚼震颤，随后点头眨眼，最后有前肢痉挛、直立及跌倒。与对照组比较，模型组大鼠癫痫发作总时间明显延长（P<0.01）；与模型组比较，miR-34a-5p抑制剂组大鼠癫痫发作总时间缩短（P<0.01）；与miR-34a-5p抑制剂组比较，抑制剂阴性对照组大鼠癫痫发作总时间延长（P<0.01）。RT-qPCR法，与对照组比较，模型组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平升高（P<0.01）；与模型组比较，miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平降低（P<0.05）；与miR-34a-5p抑制剂组比较，抑制剂阴性对照组大鼠海马组织中miR-34a-5p表达水平升高（P<0.01）。HE染色，与对照组比较，模型组细胞排列紊乱；与模型组比较，miR-34a-5p抑制剂组细胞排列整齐；与miR-34a-5p抑制剂组比较，抑制剂阴性对照组细胞形态不规整。TUNEL染色，与对照组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元凋亡率升高（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马CA1区神经元凋亡率降低（P<0.05）；与miR-34a-5p抑制剂组比较，抑制剂阴性对照组大鼠海马CA1区神经元凋亡率升高（P<0.05）。免疫组织化学法，与对照组比较，模型组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率均升高（P<0.01）；与模型组比较，miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马组织CA1区中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率降低（P<0.05）；与miR-34a-5p抑制剂组比较，抑制剂阴性对照组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白阳性表达率均升高（P<0.05或P<0.01）。Western blotting法，与对照组比较，模型组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达水平升高（P<0.01）；与模型组比较，miR-34a-5p抑制剂组大鼠海马组织中CDK6、 p-Rb和E2F1蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）；与miR-34a-5p抑制剂组比较，抑制剂阴性对照组大鼠海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。结论：颞叶癫痫大鼠海马组织中miR-34a-5p表达上调，神经元凋亡率升高，抑制miR-34a-5p表达能减少海马神经元凋亡，其机制可能与miR-34a-5p调控海马组织中CDK6、p-Rb和E2F1蛋白表达有关。

关键词

微小RNA-34a-5p / 癫痫 / 细胞凋亡 / 细胞周期蛋白依赖性激酶6 / 磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白 / E2F转录因子1