肺癌A549细胞源性外泌体中lncRNA DUXAP8对肺癌细胞生长和肿瘤免疫逃逸的作用及其机制

摘要

目的：探讨肺癌A549细胞源性外泌体（Exo）中长链非编码RNA(lncRNA) DUXAP8对肺癌细胞生长和免疫逃逸的影响，并阐明其作用机制。方法：培养人肺癌细胞系A549细胞，提取其Exo并鉴定。采用PKH67标记的Exo处理A549细胞，观察A549细胞摄取Exo情况。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测Exo处理前后A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平。将A549细胞分为对照组（不处理）、Exo组（Exo处理A549细胞）、Exo+sh-NC组（Exo处理A549细胞后，转染sh-NC至A549细胞）和Exo+sh-DUXAP8组（Exo处理A549细胞后，转染sh-DUXAP8至A549细胞）。RT-qPCR法检测各组A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平，平板集落形成实验检测各组A549细胞克隆形成能力，5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）法检测各组A549细胞增殖能力。各组A549细胞与人外周血淋巴细胞共培养后，流式细胞术检测各组人外周血淋巴细胞中活化的CD8+T淋巴细胞百分率，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测各组人外周血淋巴细胞对A549细胞的杀伤率。结果：Exo囊泡直径为50～150 nm，且分化簇63(CD63)、分化簇9(CD9)、肿瘤易感基因101(TSG101)和热休克蛋白70(HSP70)外泌体特异性标志物蛋白表达阳性，说明Exo提取成功。A549细胞能够很好地摄取PKH67标记的Exo。RT-qPCR法，与单独培养的A549细胞比较，Exo处理后，A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平升高（P<0.05）。与对照组比较，Exo组A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平升高（P<0.05）；与Exo组比较，Exo+sh-DUXAP8组A549细胞中lncRNA DUXAP8表达水平降低（P<0.05）,Exo+sh-NC组lncRNA DUXAP8表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。平板集落形成实验，与对照组比较，Exo组A549细胞中集落形成数增加（P<0.05）；与Exo组比较，Exo+sh-DUXAP8组A549细胞中集落形成数减少（P<0.05）,Exo+sh-NC组A549细胞中集落形成数差异无统计学意义（P>0.05）。EdU染色，与对照组比较，Exo组A549细胞中EdU阳性细胞率升高（P<0.05）；与Exo组比较，Exo+sh-DUXAP8组A549细胞中EdU阳性细胞率降低（P<0.05）,Exo+sh-NC组A549细胞中EdU阳性细胞率差异无统计学意义（P>0.05）。流式细胞术，与对照组比较，Exo组人外周血淋巴细胞中活化CD8+T淋巴细胞百分率降低（P<0.05）；与Exo组比较，Exo+sh-DUXAP8组人外周血淋巴细胞中活化CD8+T淋巴细胞百分率升高（P<0.05）,Exo+sh-NC组人外周血淋巴细胞中活化的CD8+T淋巴细胞百分率差异无统计学意义（P>0.05）。MTT法，与对照组比较，Exo组人外周血淋巴细胞对A549细胞的杀伤率降低（P<0.05）；与Exo组比较，Exo+sh-DUXAP8组人外周血淋巴细胞对A549细胞的杀伤率升高（P<0.05）, Exo+sh-NC组人外周血淋巴细胞对A549细胞的杀伤率差异无统计学意义（P>0.05）。结论：肺癌A549细胞源性Exo lncRNA DUXAP8促进肺癌细胞增殖和肿瘤免疫逃逸。

关键词

肺肿瘤 / 外泌体 / 长链非编码RNA / DUXAP8 / 细胞增殖 / 免疫逃逸