KHSRP通过激活JAK/STAT信号通路对结直肠癌细胞生物学行为的影响

Effect of KHSRP on biological behavior of colorectal cancer cells through activation of JAK/STAT signaling pathway

摘要

目的 探讨KH型剪切调节蛋白（KHSRP）激活Janus激酶（JAK）/信号转导与转录激活因子（STAT）信号通路对结直肠癌（CRC）恶性生物学行为的影响，并阐明其可能的作用机制。 方法 选取64例CRC患者的CRC组织和癌旁正常组织，体外培养人CRC HT29、SW620、SW480、DLD-1、LOVO和RKO细胞及人正常结直肠黏膜FHC细胞，提取CRC组织和组细胞中总RNA，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测CRC组织、癌旁正常组织和各种细胞中KHSRP mRNA表达水平。将HT29和SW620细胞分为sh-NC组（无相关性的核苷酸序列插入慢病毒质粒）和sh-KHSRP组（转染敲降KHSRP慢病毒），SW480和DLD-1细胞分为oe-NC组（无相关性的核苷酸序列插入慢病毒质粒）和oe-KHSRP组（转染过表达KHSRP慢病毒）。采用免疫组织化学（IHC）染色法分析CRC组织和癌旁正常组织中KHSRP蛋白表达情况，细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测各组CRC细胞增殖活性，Transwell小室实验检测各组CRC细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数，Western blotting法检测各组CRC细胞中KHSRP、JAK1、磷酸化JAK1（p-JAK1）、JAK2、磷酸化JAK2（p-JAK2）、STAT1、STAT2、STAT3和STAT5蛋白表达水平，裸鼠皮下移植瘤实验检测各组小鼠肿瘤质量和肿瘤体积。 结果 与癌旁正常组织比较，CRC组织中KHSRP mRNA表达水平升高（P<0.05）；与人正常结直肠黏膜FHC细胞比较，CRC细胞中KHSRP mRNA表达水平均升高（P<0.05），后续实验选择HT29和SW620细胞进行KHSRP敲降，选择SW480和DLD-1细胞进行 KHSRP过表达。Western blotting法检测，CRC组织和细胞中KHSRP蛋白表达量高于癌旁正常组织和FHC细胞。IHC染色法分析，与癌旁正常组织比较，CRC组织中KHSRP蛋白表达水平升高（P<0.01）。RT-qPCR法检测，与sh-NC组比较，sh-KHSRP组HT29和SW620细胞中KHSRP mRNA表达水平降低（P<0.01）；与oe-NC组比较，oe-KHSRP组SW480和DLD-1细胞中KHSRP mRNA表达水平升高（P<0.01），提示细胞转染成功。CCK-8法检测，与sh-NC组比较，敲降KHSRP后，sh-KHSRP组HT29和SW620细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01）；与oe-NC组比较，过表达KHSRP后，oe-KHSRP组SW480和DLD-1细胞增殖活性升高（P<0.05或P<0.01）。与sh-NC组比较，敲降KHSRP后，sh-KHSRP组HT29和SW620细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P<0.05）；与oe-NC组比较，过表达KHSRP后，oe-KHSRP组SW480和DLD-1细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数增多（P<0.05）。敲降KHSRP后，oe-KHSRP组小鼠肿瘤体积和质量小于sh-NC组（P<0.05或P<0.01）；过表达KHSRP后，oe-KHSRP组小鼠肿瘤体积和质量大于oe-NC组（P<0.05或P<0.01）。与sh-NC组比较，sh-KHSRP组CRC细胞中JAK1、p-JAK1和STAT3蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）；与oe-NC组比较，oe-KHSRP组CRC细胞中JAK1、p-JAK1和STAT3蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。 结论 KHSRP高表达可促进CRC细胞增殖、迁移和侵袭，促进小鼠CRC细胞皮下移植瘤的生长，其机制可能与其激活JAK1/STAT3信号通路有关联。

Abstract

Objective To discuss the effect of KH-type splicing regulatory protein（KHSRP） on the malignant biological behaviors of colorectal cancer （CRC） by activating the Janus kinase（JAK）/signal transducer and activator of transcription（STAT） signaling pathway， and to clarify its possible mechanism. Methods The CRC tissue and adjacent normal tissue from 64 CRC patients were selected. The human CRC cells （HT29， SW620， SW480， DLD-1， LOVO， and RKO） and normal human colorectal mucosal FHC cells were cultured in vitro. The total RNA from CRC tissue and cells were extracted， real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） was used to detect the expression levels of KHSRP in the CRC tissue， adjacent normal tissue and all kinds of cells. The HT29 and SW620 cells were divided into sh-NC group （lentiviral plasmid inserted with non-targeting nucleotide sequence） and sh-KHSRP group （transfected with KHSRP knockdown lentivirus）. The SW480 and DLD-1 cells were divided into oe-NC group （lentiviral plasmid inserted with non-targeting nucleotide sequence） and oe-KHSRP group （transfected with KHSRP overexpression lentivirus）. Immunohistochemistry （IHC） staing in method was used to analyze the expressions of KHSRP in CRC tissue and adjacent normal tissue； CCK-8 method was used to detect the proliferation activities of the CRC cells in various groups； Transwell assay was used to detect the numbers of migration and invasion cells in various groups； Western blotting method was used to detect the expression levels of KHSRP， JAK1， phosphorylated JAK1（p-JAK1）， JAK2， phosphorylated JAK2（p-JAK2）， STAT1， STAT2， STAT3， and STAT5 proteins in the CRC cells in various groups. The subcutaneous xenograft tumor models in the nude mice were used to measure the tumor volumes and weights of the mice in various groups. Results Compared with adjacent normal tissue， the expression level of KHSRP in the CRC tissue was increased （P<0.05）. Compared with FHC cells， the expression levels of KHSRP in the CRC cells were increased （P<0.05）. Therefore， the HT29 and SW620 cells were selected for knockdown of KHSRP， while the SW480 and DLD-1 cells were selected for over-expression of KHSRP. The Western blotting results showed that the expression amounts of KHSRP protein in the CRC tissue and cells were higher than those in adjacent normal tissue and FHC cells. The IHC results showed that compared with adjacent normal tissue， the expression level of KHSRP protein in CRC tissue was increased （P<0.01）. The RT-qPCR results showed that compared with sh-NC group， the expression levels of KHSRP mRNA in the HT29 and SW620 cells in sh-KHSRP group were decreased （P<0.01）； compared with oe-NC group， the expression levels of KHSRP mRNA in the SW480 and DLD-1 cells in oe-KHSRP group were increased （P<0.01）， indicating successful transfection. The CCK-8 results showed that compared with sh-NC group， the proliferation activities of the HT29 and SW620 cells in sh-KHSRP group after knockdown of KHSRP were decreased （P<0.05 or P<0.01）； compared with oe-NC group， the proliferation activities of the SW480 and DLD-1 cells in oe-KHSRP group after over-expression of KHSRP were increased （P<0.05 or P<0.01）. Compared with sh-NC group， the numbers of migration and invasion cells in the HT29 and SW620 cells in sh-KHSRP group after knockdown of KHSRP were decreased （P<0.05）； compared with oe-NC group， the numbers of migration and invasion cells in the CRC cells in oe-KHSRP group after over-expression of KHSRP were increased （P<0.05）. After knockdown of KHSRP， the tumor volume and weight in sh-KHSRP group were smaller than those in sh-NC group （P<0.05 or P<0.01）， while the tumor volume andweight in oe-KHSRP group were larger than those in oe-NC group after over-expression of KHSRP （P<0.05 or P<0.01）. Compared with sh-NC group， the expression levels of JAK1， p-JAK1， and STAT3 proteins in the CRC cells in sh-KHSRP group were significantly decreased （P<0.05 or P<0.01）； compared with oe-NC group， the expression levels of JAK1， p-JAK1， and STAT3 proteins in the CRC cells in oe-KHSRP group were significantly increased （P<0.05 or P<0.01）. Conclusion High expression of KHSRP promotes the proliferation， migration， and invasion of the CRC cells and enhances the growth of subcutaneous xenograft tumors in the mice； its mechanism may be associated with its activation of the JAK1/STAT3 signaling pathway.

Graphical abstract

关键词

结直肠肿瘤 / KH型剪切调节蛋白 / Janus激酶 / 信号转导与转录激活因子 / 恶性进展 / 细胞增殖 / 细胞侵袭 / 细胞迁移

Key words

Colorectal neoplasms / KH-type splicing regulatory protein / Janus kinase / Signal transducer and activator of transcription / Malignant progression / Cell proliferation / Cell invasion / Cell migration

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是全球第三大常见恶性肿瘤和第二大致命癌症，2020年约有190万例CRC患者，死亡约90万例^［1-3］。尽管CRC的治疗取得了进展，如手术切除和系统化疗，但由于复发和远处转移，其死亡率仍然很高^［4-5］。因此，探讨促进肿瘤启动和进展的新生物标志物并阐明其潜在的分子机制，对CRC的靶向治疗至关重要。KH型剪切调节蛋白（KH-type splicing regulatory protein，KHSRP）是一种多功能核酸结合蛋白，在肿瘤侵袭中起重要作用，其表达水平及蛋白结构的改变与肿瘤的发生发展存在密切关联^［6-7］。Janus激酶/信号转导与转录激活因子（Janus kinase/signal transducer and activator of transcription，JAK/STAT）信号通路是一种跨膜信号转导的进化保守机制，在癌症的发生发展、转移和预后过程中起调控作用^［8-9］，但KHSRP-JAK/STAT信号轴在CRC发病中的具体作用机制尚未明确。本文作者通过预实验初步验证了KHSRP和JAK/STAT信号通路在CRC细胞中的表达水平，在此基础上，本研究探讨KHSRP对CRC进展的影响，以及KHSRP是否通过调节JAK/STAT信号转导促进或抑制CRC发展，从而为CRC分子靶向治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1　组织标本、细胞、实验动物、主要试剂和仪器

本研究选取2017年1月—2018年12月在河南大学淮河医院确诊的64例CRC患者的CRC组织及其癌旁正常组织标本。患者纳入标准：①影像和病理确诊的CRC；②进行根治性切除术治疗，并有完整的临床病理记录。排除标准：①曾经接受手术、放化疗或辅助治疗的患者；②存在基础疾病及其他恶性肿瘤病史；③临床病理资料记录不全。本研究经河南大学淮河医院伦理委员会批准（伦理批准号：HUSOM2023-348），所有参与者已签署知情同意书。人正常结直肠黏膜FHC细胞（宁波明舟生 物 公 司）， 人 CRC HT29、 SW620、 SW480、DLD-1、LOVO和RKO细胞（武汉普诺赛公司）。36只SPF级BALB/c雄性裸鼠，4~6周龄，体质量16~22 g，购自北京维通利华公司，饲养于河南大学医学院［动物使用许可证号：SYXK（豫）2016-0006］，实验遵循实验动物使用的3R原则。

TRIzol试剂、细胞计数试剂盒8（cell counting kit-8，CCK-8）试 剂 盒 和 10% 聚 偏 氟 乙 烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜购自美国Sigma Aldrich公司，HiScript^®Ⅱ逆转录酶试剂盒、通用型高特异性染料法定量PCR检测试剂盒、放射性免疫沉淀分析（radioimmunoprecipitation assay buffer，RIPA）缓冲液和胎牛血清（fatal bovine serun，FBS）购自北京索莱宝公司，BCA 蛋白质定量试剂盒购自南京诺唯赞公司，Transwell小室购自美国Corning Incorporated公司，慢病毒试剂购自上海吉玛公司，山羊抗兔一抗和二抗（1∶2 000）购自翌圣生物科技（上海）股份有限公司。

1.2　细胞培养、转染和分组

人正常结直肠黏膜FHC细胞和CRC HT29、SW620、SW480、DLD-1、LOVO 及 RKO 细 胞 在 含 100 U·mL^-1 青 霉 素+ 0.1 g·L^-1链霉素+10% FBS的培养基中培养，并置于37 ℃、5% CO₂的湿化培养箱中。根据获取的KHSRP全长序列设计特异性敲降和过表达的RNA序列，构建到载体上进行敲降或过表达处理（HT29和SW620细胞进行KHSRP敲降，SW480和DLD-1细胞进行KHSRP过表达）。将细胞接种至6孔细胞培养板中，加入无双抗的完全培养基DMEM至2 mL，置入培养箱中进行培养，当细胞生长至70%~80%密度时开始转染，从-80 ℃冰箱取出sh-KHSRP和敲降对照sh-NC慢病毒及KHSRP慢病毒和过表达对照Vector慢病毒置于冰上，待融化后分别吸取20 µL慢病毒和2 µL polybrene液加入原先铺好的6孔细胞培养板中，混匀后置于培养箱中培养，48~72 h后弃去板中带病毒液的培养基，加入嘌呤霉素（至其浓度为4 mL·L^-1），24~48 h后，其浓度增加至8 mL·L^-1，根据细胞状态继续筛选、观察直至无死亡细胞后得到稳定转染的细胞。将HT29和SW620细胞分为sh-NC组（为无相关性的核苷酸序列插入慢病毒质粒）及sh-KHSRP组（转染敲降KHSRP的慢病毒）；将SW480和DLD-1细胞分为oe-NC组（为无相关性的核苷酸序列插入慢病毒质粒）及oe-KHSRP组（转染过表达KHSRP的慢病毒）。

1.3　实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）法检测CRC组织和CRC细胞中KHSRP mRNA表达水平

采用TRIzol试剂盒从CRC组织和细胞中提取总RNA，采用M-MLV RTase试剂盒将总RNA逆转录至cDNA中。然后采用RT-qPCR试剂盒对KHSRP mRNA表达水平进行定量分析，以GAPDH作为内参基因，采用2^-ΔΔCt法计算KHSRP mRNA表达水平。PCR引物序列见表1。

1.4　免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）染色法检测CRC组织中KHSRP蛋白表达水平

将癌旁正常组织和CRC组织石蜡标本进行烤片、二甲苯脱蜡及酒精水化处理。然后进行微波炉抗原修复，并采用3%过氧化氢溶液孵育以阻断内源性过氧化物酶。KHSRP抗体稀释后4 ℃孵育过夜。第2天，磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）清洗后加入二抗室温孵育30 min，DAB显色，苏木素复染细胞核，氨水返蓝，最后封片。在光学显微镜下按染色强度（无染色计0分，浅棕色弱染色计1分，棕色中度染色计2分，深棕色强染色计3分）和阳性范围（1分：0%<阳性率<25%，2分：25%≤阳性率<50%，3分：50%≤阳性率<75%，4分：75%≤阳性率≤100%）评分。上述2项评分相加，0~2分为低表达，3~7分为高表达。以IHC染色评分代表KHSRP蛋白表达水平。

1.5　CCK-8法检测各组CRC细胞增殖活性

将细胞接种于96孔细胞培养板中，每孔1×10⁴个细胞，并置于含10% FBS的100 μL培养基中培养。向含CCK-8试剂的每孔中加入10 μL，并将混合物在37 ℃下孵育2 h。在酶标仪450 nm波长处测量吸光度（A）值，计算细胞增殖活性，评估细胞的生长情况。细胞增殖活性＝（实验孔A值-空白孔A值）/（对照孔A值-空白孔A值）×100%，其中对照孔为空白对照组，空白孔为培养基对照组（用于调零）。

1.6　Transwell小室实验检测各组CRC细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数

选择8 μm孔径的Transwell小室进行细胞侵袭和迁移能力的评估。细胞迁移实验：将5×10⁴个细胞加入200 μL无血清培养基中，并接种至无包膜的上腔室孔中，同时向下腔室中加入800 μL含10%FBS的培养基。采用100%甲醇固定通过聚碳酸酯膜（孔径0.1~12.0 μm）迁移的细胞，采用0.1%结晶紫染色30 min，在光学显微镜下成像和计数。细胞侵袭实验：将细胞接种至预铺基质胶的Transwell小室的上室中，其他实验步骤与细胞迁移实验相同。

1.7　Western blotting法检测CRC组织和细胞中KHSRP及其相关蛋白表达水平

采用T-PER^®蛋白提取试剂提取细胞和组织蛋白，并采用Pierce^TM BCA蛋白质检测试剂盒测定蛋白质浓度。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分离蛋白质，并转移到PVDF膜中。在室温条件下，采用5%脱脂牛奶溶液封闭膜1 h，以减少非特异性结合。将膜与GAPDH抗体和针对KHSRP的一抗4 ℃过夜孵育。孵育完成后，采用TBST缓冲液清洗膜3次，以去除未结合的抗体。将膜与二抗一起在室温下孵育1.5 h后进行信号检测，以可视化蛋白条带。采用ECL化学发光试剂盒曝光显影，采用Image J软件分析蛋白质条带的灰度值，计算目的蛋白表达水平。目的蛋白表达水平=目的蛋白条带灰度值/GAPDH蛋白条带灰度值。

1.8　裸鼠皮下移植瘤实验检测各组小鼠肿瘤生长情况

取sh-NC组和sh-KHSRP组HT29细胞以及oe-NC组和oe-KHSRP组SW480细胞，密度为5×10⁶ mL^-1，分别皮下接种至36只裸鼠的右背侧（每组8只）。每3 d测量1次小鼠肿瘤长和宽及质量，并计算肿瘤体积，肿瘤体积=（长×宽²）/2。3~4周后，处死小鼠，取出肿瘤并固定于甲醛溶液中。

1.9　统计学分析

采用GraphPad Prism 8统计软件进行统计学分析和绘图。各组细胞中KHSRP mRNA和蛋白表达水平、JAK/STAT蛋白表达水平、细胞增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数、肿瘤质量和肿瘤体积均符合正态分布，以x±s表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间样本均数两两比较采用LSD-t检验，2组间样本均数比较采用两独立样本t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1　CRC组织和细胞中KHSRP mRNA及蛋白表达水平

RT-qPCR检测结果显示：与癌旁正常组织比较，CRC组织中KHSRP mRNA表达水平升高（P<0.05）；与人正常结直肠黏膜FHC细胞比较，CRC细胞中KHSRP mRNA表达水平均升高（P<0.05），后续实验选择HT29和SW620细胞进行KHSRP敲降，选择SW480和DLD-1细胞进行 KHSRP过表达。Western blotting法检测结果显示：CRC组织和细胞中KHSRP蛋白表达水平高于癌旁组织及FHC细胞。IHC染色法分析结果显示：与癌旁正常组织比较，在CRC组织中KHSRP蛋白表达水平升高（P<0.01）。见图1~4。

2.2　敲降或过表达KHSRP后CRC细胞中KHSRP mRNA表达水平

RT-qPCR法检测结果显示：与sh-NC组比较，sh-KHSRP组HT29和SW620细胞中KHSRP mRNA表达水平降低（P<0.01）；与oe-NC组比较，oe-KHSRP组SW480和DLD-1细胞中KHSRP mRNA表达水平升高（P<0.01），提示细胞转染成功。见图5。

2.3　各组CRC细胞增殖活性

CCK-8法检测结果显示：与sh-NC组比较，敲降KHSRP后，sh-KHSRP组HT29和SW620细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01）；与oe-NC组比较，过表达KHSRP后，sh-KHSRP组SW480和DLD-1细胞的增殖活性升高（P<0.05或P<0.01）。见图6。

2.4　各组CRC细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数

与sh-NC组比较，sh-KHSRP组HT29和SW620细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P<0.05）；与oe-NC组比较，oe-KHSRP组SW480和DLD-1细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数增多（P<0.05）。见图7~14。

2.5　各组裸鼠皮下移植瘤的体积和质量

敲降KHSRP后，sh-KHSRP组小鼠肿瘤体积和质量小于sh-NC组（P<0.05或P<0.01）；过表达KHSRP后，oe-KHSRP组小鼠肿瘤体积和质量大于oe-NC组（P<0.05或P<0.01）。见图15。

2.6　敲降或过表达KHSRP后CRC细胞中JAK/STAT信号通路相关蛋白表达水平

与sh-NC组比较，sh-KHSRP组CRC细胞中JAK1、p-JAK1和STAT3蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）；与oe-NC组比较，oe-KHSRP组CRC细胞中JAK1、p-JAK1和STAT3蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。见图16和17。

3 讨 论

癌症的发病机制是一个复杂的多因素过程，癌细胞具有生存优势和增殖、侵袭及迁移能力^［10］。近年来，已有多项研究^［11-13］聚焦于KHSRP在肿瘤的形成和发展过程中所扮演的角色。YAN等^［14］发现：KHSRP可促进非小细胞肺癌的肿瘤生长和转移。TANIUCHI等^［6］发现：KHSRP位于胰腺癌细胞系的细胞核和细胞突起中，通过小干扰RNA抑制KHSRP，可减少细胞突起的数量，抑制胰腺癌细胞的侵袭性和转移性。因此，本研究从细胞、动物和人体组织3个水平上进行分析，同时在细胞功能实验中采取双细胞系双向验证，分析KHSRP在调节CRC细胞侵袭和转移中发挥的生物学功能。

本研究强调了KHSRP-JAK1/STAT3在CRC发展中的重要作用，表明其上调与肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移的增加存在密切关联。通过体外和体内实验探讨KHSRP在调控CRC细胞侵袭及转移中的生物学功能。首先验证了在人正常结直肠黏膜细胞和CRC细胞中KHSRP的表达差异情况，结果显示：KHSRP在CRC细胞中的表达上调，并从组织水平上得到进一步验证；体外细胞功能实验显示：敲降KHSRP在体外可以抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭，过表达KHSRP则会促进CRC细胞增殖、迁移和侵袭。本研究在裸鼠体内构建皮下移植瘤，结果显示：裸鼠体内肿瘤的质量和体积受体内KHSRP表达水平的影响，过表达KHSRP会促进裸鼠体内肿瘤质量和体积的增大。

研究^［15-18］显示：JAK/STAT信号通路参与癌症细胞恶性进展。JAK是细胞因子和生长激素信号传导的介质。激活的STAT蛋白转位到细胞核，调节参与细胞增殖、分化和凋亡的基因转录^［19］。JAK/STAT信号转导是癌症进展的基石，既可以作为癌症生长/转移的肿瘤内在驱动因素，也可以作为免疫监视的调节剂^［20-22］。WANG等^［22］发现：CircNOL10通过调节miR-767-5p/SOCS2轴使JAK2/STAT5信号失活来抑制乳腺癌细胞的增殖。研究^［23］显示：JAK/STAT信号通路在RCC肿瘤免疫中的重要调控功能。本研究结果表明：JAK1/STAT3信号通路可能是KHSRP在CRC中的发挥致癌作用的关键因素之一，KHSRP介导的肿瘤生长和转移部分归因于JAK1/STAT3信号通路的激活，在CRC的发生和转移过程中发挥重要作用。

综上所述，KHSRP可以通过JAK1/STAT3信号通路促进CRC细胞的增殖、侵袭和迁移，未来KHSRP有可能成为CRC治疗潜在的分子标志物和新的治疗靶点。本研究的局限性包括样本量有限和来源单一，无法全面分析肿瘤异质性对KHSRP-JAK1/STAT3信号通路功能的影响。KHSRP-JAK1/STAT3信号通路作为治疗靶点的具体作用机制仍需进一步阐明。

参考文献

[1] XI Y， XU P F. Global colorectal cancer burden in 2020 and projections to 2040［J］. Transl Oncol， 2021， 14（10）： 101174.

[2] XIA C F， DONG X S， LI H， et al. Cancer statistics in China and United States， 2022： profiles， trends， and determinants［J］. Chin Med J （Engl）， 2022， 135（5）： 584-590.

[3] SUNG H， FERLAY J， SIEGEL R L， et al. Global cancer statistics 2020： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries［J］. CA Cancer J Clin， 2021， 71（3）： 209-249.

[4] MORGAN E， ARNOLD M， GINI A， et al. Global burden of colorectal cancer in 2020 and 2040： incidence and mortality estimates from GLOBOCAN［J］. Gut， 2023， 72（2）： 338-344.

[5] XU Y Q， BAO Y X， QIU G Z， et al. METTL3 promotes proliferation and migration of colorectal cancer cells by increasing SNHG1 stability［J］. Mol Med Rep， 2023， 28（5）： 217.

[6] TANIUCHI K， OGASAWARA M. KHSRP-bound small nucleolar RNAs associate with promotion of cell invasiveness and metastasis of pancreatic cancer［J］. Oncotarget， 2020， 11（2）： 131-147.

[7] CAIAZZA F， OFICJALSKA K， TOSETTO M， et al. KH-type splicing regulatory protein controls colorectal cancer cell growth and modulates the tumor microenvironment［J］. Am J Pathol， 2019， 189（10）： 1916-1932.

[8] JOHNSON H M， NOON-SONG E， AHMED C M. Noncanonical IFN signaling， steroids， and STATs： a probable role of V-ATPase［J］. Mediators Inflamm， 2019， 2019： 4143604.

[9] XUE C， YAO Q F， GU X Y， et al. Evolving cognition of the JAK-STAT signaling pathway： autoimmune disorders and cancer［J］. Signal Transduct Target Ther， 2023， 8（1）： 204.

[10] HANAHAN D. Hallmarks of cancer： new dimensions［J］. Cancer Discov， 2022， 12（1）： 31-46.

[11] XU J Y， WANG D S， MA H L， et al. KHSRP combines transcriptional and posttranscriptional mechanisms to regulate monocytic differentiation［J］. Blood Sci， 2022， 4（3）： 103-115.

[12] CHEN L， ZHAO T J. Identification of KHSRP-regulated RNAs in esophageal cancer by integrated bioinformatics analysis［J］. Cancer Biother Radiopharm， 2021， 36（5）： 412-424.

[13] HUANG J G， SACHDEVA M， XU E， et al. The long noncoding RNA NEAT1 promotes sarcoma metastasis by regulating RNA splicing pathways［J］. Mol Cancer Res， 2020， 18（10）： 1534-1544.

[14] YAN M X， SUN L， LI J， et al. RNA-binding protein KHSRP promotes tumor growth and metastasis in non-small cell lung cancer［J］. J Exp Clin Cancer Res， 2019， 38（1）： 478.

[15] HE L， TIAN L. Downregulation of miR-409-3p suppresses LPS-induced inflammation in human bronchial epithelial cells through SOCS3/JAK1/STAT3 signaling： The implication for bronchopneumonia［J］. Mol Med Rep， 2021， 23（3）： 190.

[16] TANG J J， HAO T D K， LIM J J， et al. JAK/STAT signaling in hepatocellular carcinoma［J］. Hepat Oncol， 2020， 7（1）： HEP18.

[17] LIU C R， FENG H Q， SONG L H， et al. Synergistic effects of thalidomide and cisplatin are mediated via the PI3K/AKT and JAK1/STAT3 signaling pathways in cervical cancer［J］. Oncol Rep， 2022， 48（4）： 169.

[18] SARAPULTSEV A， GUSEV E， KOMELKOVA M， et al. JAK-STAT signaling in inflammation and stress-related diseases： implications for therapeutic interventions［J］. Mol Biomed， 2023， 4（1）： 40.

[19] LAMICHHANE S， MO J S， SHARMA G， et al. microRNA 452 regulates IL20RA-mediated JAK1/STAT3 pathway in inflammatory colitis and colorectal cancer［J］. Inflamm Res， 2021， 70（8）： 903-914.

[20] JIANG Y， XU C H， ZHAO Y， et al. LINC00926 is involved in hypoxia-induced vascular endothelial cell dysfunction via miR-3194-5p regulating JAK1/STAT3 signaling pathway［J］. Eur J Histochem， 2023， 67（1）： 3526.

[21] BROOKS A J， PUTOCZKI T. JAK-STAT signalling pathway in cancer［J］. Cancers （Basel）， 2020， 12（7）： 1971.

[22] WANG F， WANG X C， LI J R， et al. CircNOL10 suppresses breast cancer progression by sponging miR-767-5p to regulate SOCS₂/JAK/STAT signaling［J］. J Biomed Sci， 2021， 28（1）： 4.

[23] CHAN S， LIU Z X， CHEN Y Y， et al. The JAK-STAT signaling-related signature serves as a prognostic and predictive biomarker for renal cell carcinoma immunotherapy［J］. Gene， 2024， 927： 148719.

基金资助

河南省教育厅资助项目(24A320002)

河南省教育厅资助项目(25B320014)

河南省教育厅资助项目(25B320018)

河南省教育厅资助项目(25B320022)

河南省科技厅指导项目(242102310280)

河南省科技厅指导项目(242102310184)

河南省科技厅指导项目(242312310197)

河南省科技厅指导项目(242102310100)