KHSRP通过激活JAK/STAT信号通路对结直肠癌细胞生物学行为的影响

摘要

目的：探讨KH型剪切调节蛋白（KHSRP）激活Janus激酶（JAK）/信号转导与转录激活因子（STAT）信号通路对结直肠癌（CRC）恶性生物学行为的影响，并阐明其可能的作用机制。方法：选取64例CRC患者的CRC组织和癌旁正常组织，体外培养人CRC HT29、SW620、SW480、DLD-1、LOVO和RKO细胞及人正常结直肠黏膜FHC细胞，提取CRC组织和组细胞中总RNA，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测CRC组织、癌旁正常组织和各种细胞中KHSRP mRNA表达水平。将HT29和SW620细胞分为sh-NC组（无相关性的核苷酸序列插入慢病毒质粒）和sh-KHSRP组（转染敲降KHSRP慢病毒），SW480和DLD-1细胞分为oe-NC组（无相关性的核苷酸序列插入慢病毒质粒）和oe-KHSRP组（转染过表达KHSRP慢病毒）。采用免疫组织化学（IHC）染色法分析CRC组织和癌旁正常组织中KHSRP蛋白表达情况，细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组CRC细胞增殖活性，Transwell小室实验检测各组CRC细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数，Western blotting法检测各组CRC细胞中KHSRP、 JAK1、磷酸化JAK1(p-JAK1)、 JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT1、STAT2、STAT3和STAT5蛋白表达水平，裸鼠皮下移植瘤实验检测各组小鼠肿瘤质量和肿瘤体积。结果：与癌旁正常组织比较，CRC组织中KHSRP mRNA表达水平升高（P<0.05）；与人正常结直肠黏膜FHC细胞比较，CRC细胞中KHSRP mRNA表达水平均升高（P<0.05），后续实验选择HT29和SW620细胞进行KHSRP敲降，选择SW480和DLD-1细胞进行KHSRP过表达。Western blotting法检测，CRC组织和细胞中KHSRP蛋白表达量高于癌旁正常组织和FHC细胞。IHC染色法分析，与癌旁正常组织比较，CRC组织中KHSRP蛋白表达水平升高（P<0.01）。RT-qPCR法检测，与sh-NC组比较，sh-KHSRP组HT29和SW620细胞中KHSRP mRNA表达水平降低（P<0.01）；与oe-NC组比较，oe-KHSRP组SW480和DLD-1细胞中KHSRP mRNA表达水平升高（P<0.01），提示细胞转染成功。CCK-8法检测，与sh-NC组比较，敲降KHSRP后，sh-KHSRP组HT29和SW620细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01）；与oe-NC组比较，过表达KHSRP后，oe-KHSRP组SW480和DLD-1细胞增殖活性升高（P<0.05或P<0.01）。与sh-NC组比较，敲降KHSRP后，sh-KHSRP组HT29和SW620细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P<0.05）；与oe-NC组比较，过表达KHSRP后，oe-KHSRP组SW480和DLD-1细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数增多（P<0.05）。敲降KHSRP后，oe-KHSRP组小鼠肿瘤体积和质量小于sh-NC组（P<0.05或P<0.01）；过表达KHSRP后，oe-KHSRP组小鼠肿瘤体积和质量大于oe-NC组（P<0.05或P<0.01）。与sh-NC组比较，sh-KHSRP组CRC细胞中JAK1、 p-JAK1和STAT3蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）；与oe-NC组比较，oe-KHSRP组CRC细胞中JAK1、p-JAK1和STAT3蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论结论：KHSRP高表达可促进CRC细胞增殖、迁移和侵袭，促进小鼠CRC细胞皮下移植瘤的生长，其机制可能与其激活JAK1/STAT3信号通路有关联。

关键词

结直肠肿瘤 / KH型剪切调节蛋白 / Janus激酶 / 信号转导与转录激活因子 / 恶性进展 / 细胞增殖 / 细胞侵袭 / 细胞迁移