绵羊咽拭子中牛生殖支原体的分离与鉴定

摘要

为确认绵羊肺炎的病原体中是否存在支原体（Mycoplasma）及其类型，采用分子生物学鉴定和支原体分离培养的方法，对疑似患病绵羊的鼻拭子和咽拭子样本进行检测。在分子生物学检测中，利用支原体特异性引物进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳结果证实样本中存在支原体感染。同时，利用改良的Thiaucourt's培养基开展支原体分离培养工作，通过连续传代获得纯化培养物。在固体培养基上，培养物菌落呈现出典型的“煎蛋”形态，经Dienes染色后呈现蓝色，符合支原体形态学特征。为进一步明确菌株类型，通过PCR特异性扩增菌株的16S rRNA序列，并对扩增产物进行测序，将所得序列与GenBank数据库中已知的支原体序列进行比对分析及构建系统进化树。结果显示，该菌株与牛生殖支原体（Mycoplasma bovigenitalium,GenBank:AP017902.1）的16S rRNA基因序列一致性高达99.7%，且在进化树上与多株牛生殖支原体聚于同一分支，确认该菌株属于牛生殖支原体。综上所述，该研究从绵羊的咽拭子中成功分离出1株牛生殖支原体。

关键词

绵羊 / 肺炎 / 支原体 / 分子生物学 / PCR / 牛生殖支原体