接种密度对牛颗粒细胞形态及相关基因表达的影响

摘要

牛卵巢颗粒细胞是雌激素（Estrogen,E₂）合成的主要来源，具有E₂活性的牛颗粒细胞体外模型的建立是研究E₂合成与分泌过程中潜在调控机制的重要工具，该细胞模型的建立可为E₂合成分子调控机制及牛卵巢卵泡发育机制的研究提供理论与技术支持。细胞接种密度是颗粒细胞体外培养模型的关键因素，高密度可引起细胞生理及分子的显著变化。研究通过不同接种密度下的形态变化和基因表达筛选牛颗粒细胞体外培养最优接种密度，采用长期无血清法培养牛原代颗粒细胞，培养液中添加FSH及IGF-1以诱导E₂的合成。培养7 d后，采集6孔板中高（3.0×10～6个细胞/孔）、中（2.0×10～6个细胞/孔）、低（1.0×10～6个细胞/孔）3种不同接种密度的细胞图像进行观测，并利用qRT-PCR技术检测3种不同接种密度中相关基因的表达情况。结果表明，低密度（1.0×10～6个细胞/孔）接种细胞呈现成纤维细胞样外观，细胞无聚集倾向；中密度组（2.0×10～6个细胞/孔）可观察到少量聚集的细胞团；高密度（3.0×10～6个细胞/孔）培养条件下，大多数细胞聚集成细胞团。低密度组（1.0×10～6个细胞/孔）中，CYP19A1及FSHR高表达，RGS2及VNN2低表达；高密度组（3.0×10～6个细胞/孔）表达量则相反。综上所述，低密度组（1.0×10～6个细胞/孔）细胞可作为具有E₂活性的牛颗粒细胞体外模型。

关键词

牛 / 颗粒细胞 / 接种密度 / 无血清培养 / 细胞培养模型