基于LiCl法优化酿酒葡萄叶片的RNA提取

摘要

为获得纯度高、质量好的酿酒葡萄植株叶片RNA以用于荧光实时定量分析，为后续以酿酒葡萄叶片RNA为材料研究相关转录水平的调控提供技术保障，以经典酿酒葡萄赤霞珠叶片为试验材料，比较分析了重蒸酚法、Trizol法、改良的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法和LiCl法（基于改良的SDS法）4种方法对酿酒葡萄叶片RNA提取的影响。结果表明，重蒸酚法提取RNA浓度较低，完整性较差，存在部分降解；Trizol法提取的RNA则有部分DNA污染；改良CTAB法提取浓度较高，但蛋白和DNA污染严重；LiCl法提取结果显示，28S的条带亮度是18S的2倍，条带无拖尾，完整性较好，存在DNA污染和少量的蛋白污染。进一步在LiCl法基础上利用醋酸钠、DNAase消化、苯酚抽提法进一步优化，并采用荧光实时定量验证，结果表明，醋酸钠的加入RNA质量无明显改善；然而，经氯仿和水饱和酚（体积比1∶1）抽提2次，氯仿抽提1次，氯仿和水饱和酚（体积比1∶1）抽提1次，并经DNAase进行消化，最终提取出质量浓度为173.611μg/mL、A260/280为1.803纯度高、完整性较好且无蛋白和DNA污染的葡萄叶片总RNA；经实时荧光定量PCR进一步验证，该方法提取的RNA经反转录后获得较好的扩增曲线以及融解曲线，并能够对相关基因进行定量分析。

关键词

酿酒葡萄 / 赤霞珠 / RNA提取 / LiCl法优化 / qRT-PCR