温经通络汤含药血清对小鼠软骨细胞损伤及IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴的影响研究

摘要

目的 研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β（IL-1β）诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制。方法 采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型，检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶（MMP）3、MMP9、MMP13、ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4（ADAMTS4）以及糖酵解相关酶乳酸脱氢酶A（LDHA）、M2型丙酮酸激酶（PKM2）、还原型辅酶Ⅱ氧化酶2（NOX2）、还原型辅酶Ⅱ氧化酶4（NOX4）的mRNA表达；测定细胞内MMP3、MMP13、P65、IκB-ζ、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）以及LDHA蛋白表达水平；进一步检测细胞上清液中一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）和乳酸的浓度，测定细胞内辅酶Ⅰ（NAD）的还原态（NADH）和氧化态（NAD⁺）的比率，以及细胞内活性氧（ROS）水平。结果 温经通络汤含药血清可显著抑制IL-1β软骨细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达（P<0.01）,降低细胞上清液中NO浓度（P<0.05,P<0.01）,下调IκB-ζ（P<0.05）和P65蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。温经通络汤含药血清可显著下调MMP3、MMP9、MMP13以及ADAMTS4 mRNA表达（P<0.01）,抑制MMP13（P<0.05,P<0.01）和MMP3（P<0.05）的蛋白表达。氧化应激方面，它可显著抑制软骨细胞内ROS的产生，提高NADH/NAD⁺比率，降低上清液中MDA浓度，下调HIF-1α蛋白表达（P<0.01）。温经通络汤含药血清可显著降低乳酸浓度，下调LDHA、PKM2、NOX2、NOX4的表达，降低细胞内糖酵解水平（P<0.05,P<0.01）。结论 温经通络汤含药血清可通过抑制炎症、软骨降解、氧化应激和糖酵解，缓解IL-1β诱导的小鼠原代软骨细胞损伤，其机制可能与调控IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴有关。

关键词

温经通络汤含药血清 / IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴 / 白细胞介素-1β / 软骨细胞损伤