基于血清药物化学和网络药理学的知母-黄柏药对盐炙前后治疗2型糖尿病药效物质基础及作用机制分析

摘要

目的 基于液质联用技术对生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对水提液灌胃给药后大鼠入血成分分析，结合网络药理学预测盐炙在知母-黄柏药对治疗2型糖尿病的影响，并通过体外实验进行初步验证。方法 大鼠连续灌胃给药生知母-生黄柏药对、盐知母-盐黄柏药对水提液2次，中间间隔1 h,末次给药60 min后腹主动脉取血，用甲醇沉淀蛋白法处理后复溶，采用色谱柱Shim-pack GIST C₁₈（4.6 mm×150 mm, 5μm）;流动相A相为0.1%甲酸水，B相为0.1%甲酸-乙腈；梯度洗脱，正、负离子全扫描模式，质量扫描范围m/z 100～1 500。结合数据库二级谱图及文献，分析鉴定生知母-生黄柏、盐知母-盐黄柏药对的入血成分。检索2型糖尿病疾病靶点，对入血成分和疾病的交集靶点进行蛋白质互作网络分析、GO、KEGG通路富集分析，构建“入血成分-靶点”网络图，运用AutoDock软件对筛选出的核心成分和核心靶点进行分子对接验证。验证实验以HepG2细胞为实验对象，胰岛素联合高糖诱导胰岛素抵抗模型，CCK8法检验盐炙前后知母-黄柏药对对细胞增殖影响，Western blot检测PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果 生知母-生黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出15种原型成分，1个芒果苷代谢成分。盐知母-盐黄柏药对水提液大鼠血清中鉴定出17个原型成分，1个芒果苷代谢成分。盐炙后入血成分中芒果苷、小檗碱、3-异丁基戊二酸等成分含量较生品高。KEGG和GO结果显示，知母-黄柏药对治疗2型糖尿病可能与RNA聚合酶的转录调控、炎症反应、AGE-RAGE、PI3K-AKT、胰岛素抵抗等通路有关。细胞实验表明盐炙前后知母-黄柏药对可以上调p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、GLUT4蛋白表达，且盐炙组效果优于生品组。结论 初步阐释了知母-黄柏药对盐炙前后入血成分，阿魏酸、小檗碱、小檗红碱、芒果苷与mTOR、SIRT1、EGFR、PPARA等可能是知母-黄柏药对盐炙后增强2型糖尿病治疗效果的主要成分和靶点，其机制可能是增强了PI3K-AKT等相关通路的作用，为知母-黄柏药对盐炙前后药效物质基础研究及临床应用提供重要参考。

关键词

知母-黄柏药对 / 盐炙 / 血清药物化学 / 2型糖尿病 / 网络药理学 / 分子对接 / 细胞验证