复方地黄颗粒通过泛素-蛋白酶体系统治疗PD阴虚动风证大鼠的分子机制研究

摘要

目的 探讨复方地黄颗粒通过调节泛素-蛋白酶体系统相关蛋白变化治疗帕金森病（PD）阴虚动风证的分子机制。方法 随机选取26只SPF级雄性SD大鼠作为正常对照组、假手术组，每组13只，其余大鼠采用6-羟基多巴胺（6-OHDA）脑部偏侧注射损毁黑质法制备PD阴虚动风证大鼠模型，将成模大鼠随机分为模型组，美多芭组(150 mg·kg^-1),复方地黄颗粒低、中、高剂量组(1.75、3.5、7 g·kg^-1),每组13只。各组连续灌胃给药28 d。观察各组大鼠一般情况及神经行为学表现；免疫组化法、Western blot及qPCR法检测各组大鼠脑部损毁侧纹状体组织中泛素（UB）、泛素激活酶（UBE1）、泛素结合酶（UBE2A）、泛素羧基末端水解酶（UCH-L1）阳性细胞表达、蛋白及mRNA表达水平；ELISA法检测各组大鼠脑部损毁侧纹状体中多巴胺（DA）含量变化。结果 正常对照组与假手术组一般情况无明显差异，旋转圈数、悬挂时间及移动格数差异无统计学意义，与假手术组比较，模型组大鼠精神差，易激惹，肢体震颤，行动迟缓，毛色黯黄，饮食少，体质量减轻，旋转圈数增加、悬挂时间及移动格数减少（P<0.01）,损毁侧纹状体中UB、UBE1、UBE2A、UCH-L1阳性细胞表达、mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,DA含量明显减少（P<0.01）;与模型组比较，美多芭组及复方地黄颗粒各剂量组大鼠一般情况有所改善，旋转圈数减少、悬挂时间及移动格数增加（P<0.05,P<0.01）,UB、UBE1、UBE2A、UCH-L1阳性细胞表达、mRNA及蛋白表达水平提高（P<0.05,P<0.01）,DA含量增加（P<0.01）;行为学检测及各指标表达水平以美多芭组和复方高剂量组改善最明显（P<0.05,P<0.01）,此二者无统计学意义（P>0.05）。结论 复方地黄颗粒可能通过调控泛素-蛋白酶体系统相关蛋白的表达，减少异常蛋白聚集，从而减轻DA含量缺失，发挥治疗PD阴虚动风证的作用，并以复方地黄颗粒高剂量效果最佳。

关键词

帕金森病 / 阴虚动风证 / 复方地黄颗粒 / 泛素-蛋白酶体系统 / 分子机制