健脾养正方调控肿瘤相关巨噬细胞外泌体诱导胃癌细胞失巢凋亡的机制研究

摘要

目的 探讨健脾养正方调控肿瘤相关巨噬细胞（TAM）外泌体对胃癌失巢凋亡的影响及其机制。方法 体外诱导人单核细胞THP-1建立TAM模型；超速离心法提取M0、TAM及TAM+健脾养正方外泌体，与胃癌细胞共孵育。流式细胞术检测各组外泌体对胃癌细胞失巢凋亡的影响。构建BALB/c移植瘤小鼠模型，Western blot检测移植瘤中凋亡蛋白的表达水平。Label-free质谱蛋白组学及生物信息学分析干预前后胃癌细胞中的差异蛋白；Western blot及qPCR实验检测差异蛋白异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）表达水平，泛素化实验检测IDH1的泛素化水平；试剂盒检测α-酮戊二酸（α-KG）、NADPH/NADP⁺、谷胱甘肽（GSH/GSSG）水平及活性氧（ROS）含量。结果 TAM外泌体干预胃癌细胞后其失巢凋亡率降低（P<0.05,P<0.01）;而TAM+健脾养正外泌体干预后则显著升高（P<0.05,P<0.01）。小鼠体内实验中，TAM外泌体组瘤体内Cleaved Caspase-3/Caspase-3的比值降低（P<0.05）,而TAM+健脾养正方外泌体干预后比值明显增高（P<0.05）。蛋白组学分析显示IDH1在干预前后差异明显，且与三羧酸循环代谢相关。相较于M0组，TAM组外泌体干预的胃癌细胞IDH1泛素化水平升高，α-KG、NADPH/NADP⁺及GSH/GSSG水平明显增加，ROS含量降低（P<0.05）,而TAM+健脾养正外泌体则可逆转上述现象。结论 健脾养正方通过调控TAM外泌体使胃癌细胞IDH1发生泛素降解，降低胃癌细胞三羧酸循环代谢水平，促进ROS积累，诱发胃癌失巢凋亡，进而抑制胃癌发展。

关键词

胃癌 / 外泌体 / 肿瘤相关巨噬细胞 / IDH1 / 失巢凋亡 / Caspase-3 / 三羧酸循环代谢