回阳生肌汤通过加速树突状细胞胞葬功能促进糖尿病小鼠阴证创面愈合的作用机制研究

摘要

目的 探讨回阳生肌汤对小鼠糖尿病阴证创面愈合的作用及机制。方法 选用SPF级C57BL/6小鼠，腹腔注射链脲佐菌素和皮肤缺损法构建糖尿病溃疡模型小鼠24只，随机分为模型组，回阳生肌汤低、中、高剂量组，每组6只。另取6只小鼠构建普通创面模型作为空白组。空白组和模型组每日蒸馏水灌胃治疗，回阳生肌汤组每日回阳生肌汤灌胃治疗，每日创面拍照，记录创面愈合率，HE染色观察创面肉芽组织生长情况，Western blot检测创面胞葬相关受体Axl、Tyro3、Mertk蛋白表达，免疫组化检测创面组织CD11c表达，qPCR检测创面TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β1 mRNA表达，TUNEL染色计算创面凋亡细胞（AC）数目。采用小鼠原代骨髓树突状细胞（BMDC）,将细胞重悬于含有10%空白血清或5%、10%、20%的回阳生肌含药血清的1640培养基中，在37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养24 h后，Western blot检测创面胞葬相关受体；体外共培养BMDC和AC,流式细胞术检测BMDC吞噬AC的吞噬率。结果 回阳生肌汤各剂量组创面愈合显著快于模型组（P<0.05）;与模型组比较，回阳生肌汤高剂量组小鼠创面组织中Axl、Tyro3的蛋白表达明显升高（P<0.01,P<0.000 1）,低、中、高剂量组小鼠创面组织中Mertk蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。回阳生肌汤显著抑制创面组织IL-1β、TNF-α mRNA的表达（P<0.05）,促进TGF-β1、IL-10 mRNA的表达（P<0.05）,且回阳生肌汤治疗后创面AC数目少于模型组（P<0.05）。体外实验中，与模型组比较，20%回阳生肌含药血清组BMDC中Axl、Mertk的蛋白表达明显升高（P<0.01,P<0.001）,5%、10%、20%回阳生肌含药血清组Tyro3蛋白表达均较模型组更高（P<0.01,P<0.001）,回阳生肌汤组BMDC吞噬AC的吞噬率高于模型组（P<0.05）。结论 回阳生肌汤通过增强树突状细胞（DC）胞葬功能，减少创面AC聚集，促进创面炎症消退和组织修复，加快皮肤创面愈合。

关键词

回阳生肌汤 / 糖尿病阴证 / 创面愈合 / 树突状细胞 / 胞葬作用 / 凋亡细胞 / 炎症