鸦胆子苦素A抑制Wnt/β-catenin抗结肠癌细胞增殖及转移的作用研究

摘要

目的 探究鸦胆子苦素A（BA）对结肠癌的抑制作用及机制。方法 采用不同浓度BA(0、1、2、5、10、20、40、80μmol·L^-1)作用于人结肠癌HT-29和HCT116细胞，利用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞活力。通过流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验，评估BA对细胞凋亡、细胞周期、侵袭和迁移能力的影响。采用分子对接模拟BA与GSK-3β蛋白的结合，并通过Western blot检测细胞周期、上皮间质转化（EMT）相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。建立HT-29细胞皮下移植瘤小鼠模型，成瘤后，将小鼠随机分为3组，即空白组，BA低、高剂量组(0.1、0.2 mg·kg^-1),每组6只，给药19 d后，处死小鼠，分离肿瘤组织。观察各组肿瘤体积随时间变化；采用Ki67免疫组化法观察各组肿瘤组织细胞增殖情况；Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果 与空白组相比，BA可显著抑制HT-29和HCT116细胞增殖，IC₅₀值为10.80μmol·L^-1和17.96μmol·L^-1。流式细胞术结果显示，BA显著诱导HT-29细胞凋亡（P<0.01,P<0.001）,并阻滞细胞周期于S期，伴随周期相关蛋白CDK2和Cyclin A表达减少（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。BA抑制细胞迁移和侵袭能力（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,降低EMT相关蛋白Snail、Vimentin、N-Cadherin的表达（P<0.01,P<0.001）,并上调E-Cadherin蛋白表达。此外，BA抑制β-catenin和p-GSK3β蛋白的表达。Wnt激动剂LiCl可显著拮抗BA的抗结肠癌作用；Wnt抑制剂XAV939可增强BA的抗结肠癌作用。而体内实验中，与空白组相比，BA低、高剂量组肿瘤体积显著缩小（P<0.05,P<0.001）。免疫组化结果显示，与空白组相比，BA低、高剂量组肿瘤组织中Ki67表达显著降低（P<0.001）。Western blot结果进一步证明BA在体内抑制Wnt/β-catenin信号通路。结论 BA抑制结肠癌HT-29细胞活力、细胞侵袭和迁移，诱导细胞凋亡并引发细胞周期停滞，并且在体内能显著抑制HT-29细胞皮下移植瘤的生长，其作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路正相关。

关键词

鸦胆子苦素A / 结肠癌 / 增殖 / 转移 / Wnt/β-catenin