疏肝益肾方对乳腺癌肺转移微环境基因表达谱及免疫相关基因表达的影响

摘要

目的 通过研究疏肝益肾方对乳腺癌小鼠肺部微环境基因表达的影响，探讨疏肝益肾方抑制乳腺癌肺转移的作用机制。方法 构建乳腺癌原位移植瘤高转移模型，随机分为生理盐水组，疏肝益肾低、中、高(0.5、1、2 g·kg^-1)剂量以及多西他赛组(5 mg·kg^-1),干预28 d。HE染色观察肺组织结构情况；对转移灶进行转录组分析，通过生物信息学分析基因表达谱的GO和KEGG通路特点，筛选关键差异基因表达情况，采用qPCR和Western blot分析关键免疫基因的表达。流式细胞术检测髓源抑制细胞（Myeloid suppressor cells, MDSCs）表达情况；ELISA法检测细胞因子和趋化因子Cxcl2、GM-CSF的表达。结果 与生理盐水组相比，疏肝益肾方中、高剂量组与多西他赛组肺组织转移结节数量均有相应减少；HE染色提示肺部病理程度有所改善。疏肝益肾方高剂量组与生理盐水组的肺组织微环境有814个差异表达基因，其中713个基因下调，101个基因上调；筛选疏肝益肾组中关键炎性介质基因Nfkbiz、Tnfaip3、Maff、Hspa1a、Hspb1、Cxcl2,与生理盐水组相比，疏肝益肾方组炎性基因显著下调（P<0.05,P<0.01）,最终其结果与转录组结果趋势相符。采用Western blot在蛋白质层面进行验证，发现与生理盐水组相比，疏肝益肾方组Nfkbiz、Tnfaip3、Maff、Hspa1a和Cxcl2蛋白表达水平下降（P<0.05,P<0.01）,但Hspb1蛋白表达上调（P<0.01）。疏肝益肾方组和多西他赛组能够抑制MDSCs表达（P<0.001）,一定程度降低Cxcl2、GM-CSF的表达（P<0.05,P<0.01）。结论 疏肝益肾方能抑制乳腺癌肺转移，并且调控肺部免疫微环境基因，其调控范围较广。

关键词

乳腺癌 / 肺部微环境 / 基因表达谱 / 炎性介质 / 疏肝益肾方