左旋含羞草碱调控ROS/JNK/c-Jun轴诱导黑色素瘤细胞线粒体凋亡的研究

摘要

目的 探讨左旋含羞草碱对黑色素瘤细胞增殖、凋亡的影响及分子机制。方法 采用MTT法检测不同浓度左旋含羞草碱对黑色素瘤A375和B16细胞存活率的影响；平板克隆实验评估左旋含羞草碱对细胞集落形成能力的影响；流式细胞术分析左旋含羞草碱对细胞凋亡、ROS和线粒体膜电位的影响；Western blot检测细胞内Bcl-2、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bim-EL、Bad、p-JNK、p-c-Jun、p-MKK4及p-ASK1等蛋白表达水平的变化。荷瘤小鼠分别接受生理盐水、左旋含羞草碱及左旋含羞草碱联合NAC治疗后，进行肿瘤组织学和TUNEL染色分析。结果 左旋含羞草碱显著抑制了A375和B16细胞的增殖，并明显促进了细胞发生凋亡。Western blot提示左旋含羞草碱可显著提升胞质内的Apaf-1和Cyt C的含量，上调了细胞内Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax、Bim-EL和Bad的表达，下调了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。进一步的实验表明左旋含羞草碱显著诱导A375细胞内活性氧(ROS)的累积，激活了JNK/c-Jun信号通路，表现为p-JNK、p-c-Jun、p-MKK4及p-ASK1蛋白水平的显著升高。此外，抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能够显著拮抗左旋含羞草碱诱导的ROS积累，进而逆转左旋含羞草碱对黑色素瘤细胞凋亡的诱导作用。在体内实验中，NAC同样能够显著拮抗左旋含羞草碱对肿瘤生长的抑制作用，表现为肿瘤体积的增加和凋亡相关蛋白表达水平的逆转。结论 左旋含羞草碱通过增加ROS水平和激活JNK/c-Jun信号通路，诱导黑色素瘤细胞发生凋亡。

关键词

左旋含羞草碱 / 黑色素瘤 / A375细胞 / B16细胞 / 细胞凋亡 / ROS/JNK/c-Jun