犀角地黄汤调节组蛋白H3K36三甲基化抑制脓毒症炎症反应的机制研究

摘要

目的 基于网络药理学、分子对接及体内外实验探讨犀角地黄汤(XJDHT)抑制脓毒症炎症反应的分子机制。方法 采用TCMSP和HERB数据库筛选XJDHT活性成分，通过GeneCard、OMIM及DisGeNet数据库获取脓毒症与组蛋白H3K36三甲基化(H3K36me3)相关靶点。STRING数据库构建蛋白质互作网络(PPI),Cytoscape3.9.1筛选核心靶点，基因本体(GO)功能分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析潜在通路，分子对接验证配体-受体结合能力。通过盲肠结扎穿刺术(CLP)构建脓毒症小鼠模型，评估术后24 h小鼠存活率和脓毒症评分(MSS),血细胞分析仪检测血常规，ELISA检测血清IL-1β、TNF-α水平，HE染色观察肝脏病理损伤，免疫荧光检测肝巨噬细胞H3K36me3表达。脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞炎症模型，ChIP-qPCR检测细胞IL-1β、TNF-α基因表达域H3K36me3富集，Western blot分析HIF-1α、EGFR、AKT1相关通路蛋白表达。结果 共筛选出28个XJDHT的活性成分，对应987个基因靶点，与脓毒症相关的交集靶点为189个。核心靶点包括TNF、IL1B、GAPDH等。富集的相关通路包括EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等。分子对接证实核心成分与关键基因均能较好地结合。体内实验证实，与空白组比较，Model组小鼠24 h存活率显著降低(P<0.01),MSS评分显著增加(P<0.01),血常规呈免疫失衡状态，血清IL-1β和TNF-α水平显著上升(P<0.01)。XJDHT高、低剂量干预显著提高小鼠24 h存活率(P<0.01),降低MSS评分(P<0.01),调节免疫稳态，降低IL-1β和TNF-α表达(P<0.01)。Model组小鼠肝组织病理显示肝脏严重炎症损伤，肝脏Kupffer细胞H3K36me3修饰水平显著升高；XJDHT组肝脏病理损伤明显减轻，H3K36me3修饰水平显著下降。小鼠腹腔巨噬细胞中，Model组H3K36me3修饰、IL-1β、TNF-α、HIF-1α、p-AKT1/AKT1、EGFR蛋白表达均显著增加(P<0.01),XJDHT干预后上述指标下调(P<0.05,P<0.01)。体外实验中，LPS诱导THP-1细胞H3K36me3修饰及IL-1β、TNF-α蛋白表达显著增加(P<0.01),ChIP-qPCR结果显示IL-1β基因表达域H3K36me3富集(P<0.01);15%XJDHT含药血清处理24 h可降低H3K36me3修饰水平(P<0.01),减少其在IL-1β表达域募集(P<0.01),并拮抗LPS诱导的EGFR、HIF-1α及p-AKT1/AKT1相关通路激活(P<0.05,P<0.01),且HIF-1α激动剂DMOG验证进一步证实XJDHT可能通过调控HIF-1α相关通路抑制H3K36me3介导的炎症表观遗传重塑。结论 XJDHT可抑制炎症反应，调控免疫稳态，改善脓毒症预后，其作用机制可能与调控IL-1β表达域上H3K36me3的表观遗传修饰有关。

关键词

脓毒症 / 犀角地黄汤 / 组蛋白H3K36三甲基化 / 表观遗传修饰 / 炎症反应 / IL-1β / 网络药理学 / 分子对接