温肾通督方调控Akt/mTOR信号通路激活自噬调节小胶质细胞极化促进脊髓损伤大鼠恢复

摘要

目的 研究温肾通督方促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复的作用机制。方法 将144只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、强的松组、温肾通督方低剂量组、温肾通督方中剂量组、温肾通督方高剂量组、3BDO组以及3BDO+温肾通督方(中剂量)组。通过改良Allen's法构建大鼠脊髓损伤模型，造模1 d后开始干预，连续给药14 d。给药期间，通过BBB评分和斜板试验评估各组大鼠运动功能。造模第3、7、14天，采用HE染色观测各组大鼠脊髓组织病理变化；ELISA法检测血清中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的表达水平；免疫组织化学技术检测脊髓组织Beclin1、LC3B、p62蛋白表达；免疫荧光染色法检测脊髓组织CD16、CD206蛋白表达；Western blot法检测脊髓组织Beclin1、LC3B及Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，温肾通督方中剂量组大鼠BBB评分和斜板试验角度升高，脊髓组织排列紊乱、脊髓空泡和炎性浸润现象显著改善，尤以第14天差异最为显著。与假手术组相比，模型组血清IL-1β、IL-6表达水平增加(P<0.01),IL-4、IL-10表达水平降低(P<0.05,P<0.01);与模型组相比，温肾通督方组IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.01),IL-4、IL-10水平显著增加(P<0.05,P<0.01);与温肾通督方组相比，3BDO组小鼠血清IL-1β、IL-6浓度上升(P<0.01),IL-10水平下降(P<0.05)。与假手术组比较，模型组大鼠脊髓组织M1/M2比例、P62蛋白表达、p-Akt/Akt及p-mTOR/mTOR比值均显著增加(P<0.05,P<0.01),Beclin1相对蛋白表达量降低(P<0.01);与模型组比较，温肾通督方组脊髓组织M1/M2比例、p-Akt/Akt及p-p70S6K/p70S6K比值均显著降低(P<0.01)。与模型组比，3BDO组Beclin1蛋白水平下降，p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值增加(P<0.05,P<0.01)。与温肾通督方组比较，3BDO组和3BDO+温肾通督方组M1/M2比例增加(P<0.01),3BDO组Beclin1、LC3B蛋白阳性率显著下降(P<0.01),3BDO+温肾通督方组p-p70S6K/p70S6K的比值显著增加(P<0.01)。结论 温肾通督方可促进脊髓损伤修复，其机制可能为通过调控Akt/mTOR信号通路，激活自噬调节小胶质细胞极化，从而减轻脊髓神经炎症反应。

关键词

脊髓损伤 / Akt/mTOR通路 / 温肾通督方 / 自噬 / 炎症反应 / 小胶质细胞 / 3BDO / 小胶质细胞极化