祛浊通痹颗粒对高尿酸血症小鼠降尿酸作用的研究

摘要

目的 探讨祛浊通痹颗粒（QZTB）对高尿酸血症（Hyperuricemia, HUA）小鼠降尿酸及抗炎的作用机制。方法 采用超高效液相色谱-质谱（UPLC-MS）方法鉴定祛浊通痹颗粒（QZTB）成分。随机将64只C57BL/6小鼠分成对照组、模型组、苯溴马隆组、QZTB低剂量组、QZTB中剂量组、QZTB高剂量组、MCC950组、MCC950+QZTB中剂量组，每组8只。腺嘌呤(100 mg·kg^-1)联合氧嗪酸钾(500 mg·kg^-1)建立HUA小鼠模型。除对照组外，其余各组均先造模2周后给药4周。造模2周后采用小鼠眼底静脉丛取血检测血尿酸（SUA）水平，以SUA水平作为造模成功依据，持续给药4周后处死取材。采用全自动生化分析仪检测SUA、尿素氮（BUN）、血肌酐（Cr）水平；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-18（IL-18）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；采用qPCR法检测肾脏组织中尿酸转运蛋白1（URAT1）、三磷酸腺苷结合转运蛋白G2（ABCG2）、葡萄糖转运蛋白9（GLUT9）、PDZ蛋白激酶1（PDZK1）mRNA表达；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肾脏组织中尿酸转运体（URAT1、ABCG2、GLUT9、PDZK1）、核转录因子κB（NF-κB）总蛋白和磷酸化NF-κB（p-NF-κB）、Nod样受体蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸蛋白酶-1（Cleaved Caspase-1）蛋白和半胱氨酸蛋白酶-1前体蛋白（Pro-Caspase-1）表达；采用免疫组化测定肾脏组织中尿酸转运体（URAT1、ABCG2、PDZK1、GLUT9）表达水平。结果 在QZTB中鉴定了9种有代表性的活性成分。造模2周后，与对照组相比，模型组SUA显著上升（P<0.000 1）;给药4周后，模型组血清SUA、BUN、Cr显著升高（P<0.000 1）,IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α水平升高（P<0.01,P<0.001）,肾组织ABCG2、PDZK1蛋白表达减少（P<0.01,P<0.001,P<0.000 1）,URAT1、GLUT9、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65和Cleaved Caspase-1/Pro-Caspase-1蛋白表达显著升高（P<0.01,P<0.001,P<0.000 1）。与模型组相比，苯溴马隆组和QZTB低、中、高剂量干预组SUA、BUN、Cr存在不同程度的降低（P<0.001,P<0.000 1）,QZTB能有效降低血清炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α水平（P<0.05,P<0.01）,提高肾组织ABCG2、PDZK1蛋白表达（P<0.05,P<0.01,P<0.000 1）,下调URAT1、GLUT9、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65和Cleaved Caspase-1/Pro-Caspase-1蛋白表达（P<0.05,P<0.01,P<0.001,P<0.000 1）。与模型组相比，MCC950组下调NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65和Cleaved Caspase-1/Pro-Caspase-1蛋白表达（P<0.01）。与MCC950组或QZTB组相比，MCC950+QZTB组下调NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、Cleaved Caspase-1/Pro-Caspase-1蛋白表达（P<0.05,P<0.01,P<0.000 1）。结论 QZTB能够通过抑制NF-κB/NKRP3信号通路促进尿酸排泄，从而改善HUA症状。

关键词

祛浊通痹颗粒 / 高尿酸血症 / 尿酸转运体 / NF-κB / NLRP3炎症小体 / Caspase-1