蟾酥注射液抗SARS-CoV-2病毒感染的体外活性研究

摘要

目的 探究蟾酥注射液抗SARS-CoV-2病毒感染的体外活性，研究蟾毒灵是否为其发挥活性的关键成分。方法 采用CellTiter-Glo细胞活力检测法测定蟾酥注射液及蟾毒灵抗SARS-CoV-2病毒感染的半数有效浓度(EC₅₀)；通过qPCR检测蟾酥注射液和蟾毒灵对SARS-CoV-2病毒感染的细胞中病毒NP蛋白、干扰素、炎症因子等的mRNA水平的影响；构建细胞-细胞膜融合模型，采用荧光素酶报告基因方法检测蟾酥注射液和蟾毒灵对HEK-293T/HEK-293T-ACE2细胞膜融合的影响。结果 蟾酥注射液具有抗SARS-CoV-2病毒感染活性，EC₅₀为85.56 ng·mL^-1。蟾酥注射液显著降低SARS-CoV-2感染的Calu-3细胞中病毒NP蛋白的mRNA水平（P<0.05），下调干扰素IFN-λ2/3（P<0.05）以及ISG-15、RIG-I（P<0.000 1）的mRNA水平，并能显著降低炎症因子IL-6和TNF-α的mRNA水平（P<0.000 1）。蟾毒灵抑制SARS-CoV-2病毒感染细胞的EC₅₀为13.3 nmol·L^-1，可能为蟾酥注射液抗SARS-CoV-2病毒感染的主要活性成分。蟾酥注射液能显著抑制SARS-CoV-2病毒S蛋白介导的细胞膜融合，从而阻断病毒入侵。结论 蟾酥注射液具有体外抗SARS-CoV-2病毒感染的活性，能抑制NP蛋白表达、降低炎症因子水平并阻断膜融合入侵宿主细胞，蟾毒灵可能是其发挥抗SARS-CoV-2作用的关键活性物质。

关键词

蟾酥注射液 / SARS-CoV-2 / 蟾毒灵 / 抗炎 / 膜融合