益肾清利活血方抑制HIF1-α改善肾纤维化的研究

摘要

目的 运用数据挖掘及分子对接技术，结合体内外实验探究益肾清利活血方（Yishen Qingli Huoxue Formula,YQHF）通过抑制HIF1-α改善肾纤维化的机制。方法 分析GEO数据库中HIF1-α在慢性肾脏病（CKD）患者肾活检组织中的表达变化；利用分子对接，探究YQHF有效单体与HIF1-α可能的作用模式；将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、YQHF低剂量组、YQHF高剂量组、氯沙坦钾组，每组6只采用单侧输尿管结扎法（UUO）制备肾纤维化模型，检测各组大鼠的血清肌酐（Scr）及尿素氮（BUN），通过HE染色和Masson染色观察肾脏病理状态及纤维化程度，通过Western blot检测肾脏组织中HIF1-α蛋白表达；使用TGF-β1诱导NRK-52E细胞建立肾纤维化细胞模型，分为对照组、模型组、YQHF组、HIF1-α抑制剂组、HIF1-α抑制剂+YQHF组、HIF1-α激动剂组、HIF1-α激动剂+YQHF组，采用Western blot检测HIF1-α、COL-1和α-SMA的蛋白表达水平，观察YQHF含药血清保护肾小管上皮细胞的作用机制。结果 数据挖掘显示，CKD组HIF1-α表达显著高于对照组（P<0.01）；分子对接表明，YQHF核心成分与HIF1-α具有良好结合亲和力。动物实验中，与假手术组相比较，HE染色显示模型组大鼠肾小管萎缩、炎性细胞浸润，Masson染色显示胶原沉积增加（P<0.01），模型组大鼠Scr和BUN升高（P<0.05），肾组织COL-1、α-SMA、HIF1-α蛋白表达水平升高（P<0.01）。与模型组相比，YQHF高、低剂量组和氯沙坦钾组干预后肾脏病理损伤减轻，Masson染色显示胶原沉积减少（P<0.01）,Scr和BUN存在不同程度的降低（P<0.05），降低COL-1、α-SMA、HIF1-α表达水平（P<0.01），免疫组化显示UUO大鼠肾脏组织中HIF1-α的表达减少（P<0.01）。细胞实验结果显示，TGF-β1刺激后，NRK-52E细胞COL-1、α-SMA及HIF-1α蛋白水平显著升高（P<0.01）。YQHF和氯霉素单用均可下调上述3种蛋白（P<0.05,P<0.01）；二者联用后对HIF-1α的抑制优于YQHF单用（P<0.05）。相反，HIF-1α激动剂芬苯达唑-d3可逆转YQHF的抗纤维化效应，使COL-1、α-SMA、HIF-1α再度升高（P<0.01），且联合组与激动剂单用组差异无统计学意义。结论 YQHF可能通过抑制HIF1-α的蓄积抑制细胞外基质沉积，延缓肾纤维化进程，为肾纤维化的中医药治疗提供了新的理论依据和思路。

关键词

益肾清利活血方 / 肾纤维化 / HIF1-α / 数据挖掘 / 分子对接 / UUO大鼠 / NRK-52E细胞

基金资助

国家自然科学基金面上项目(82174295); 江苏省医学创新中心(CXZX202233); 泰州市社会发展项目(SSF20210146)