益气温阳方调控SIRT1抑制变应性鼻炎小鼠线粒体过度分裂及炎症反应的研究

摘要

目的 探讨益气温阳方干预变应性鼻炎（AR）小鼠的潜在效应机制。方法 C57/BL6小鼠随机分为空白、模型、益气温阳方及益气温阳方+EX-527[(SIRT1)抑制剂]组，以卵白蛋白基础联合攻击致敏的方法建立小鼠AR模型，各组予对应措施干预后，评估小鼠行为学变化；以HE及甲苯胺蓝染色观察鼻黏膜病变；ELISA法测定血清白介素-4(IL-4)、小鼠干扰素γ(IFN-γ)、免疫球蛋白E(IgE)水平；Western blot联合免疫荧光法测定鼻黏膜组织中磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导与转录因子6(p-STAT6)、磷酸化动力样蛋白1(p-Drp1)、SIRT1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)表达水平；荧光探针法检测活性氧（ROS）水平；透射电镜观察鼻黏膜微观结构中线粒体形态改变。结果 与空白组比较，模型组小鼠搔鼻与喷嚏频次升高，鼻黏膜见大量嗜酸性粒细胞及肥大细胞浸润（P<0.05）；与模型组比较，益气温阳方组小鼠鼻过敏症状及鼻黏膜炎症反应水平显著改善（P<0.05）；与益气温阳方组比较，益气温阳方+EX-527组小鼠搔鼻与喷嚏升高，鼻黏膜见嗜酸性粒细胞及肥大细胞计数显著增加（P<0.05）。与模型组比较，益气温阳方组小鼠血清IL-4、IgE水平降低，血清IFN-γ水平回升（P<0.05）；而益气温阳方+EX-527组小鼠血清IL-4、IgE较益气温阳方组小鼠升高（P<0.05）。Western blot与免疫荧光均表明，益气温阳方可有效抑制卵白蛋白致敏诱导的p-JAK2、p-STAT6、p-Drp1(Ser616)水平的升高，以及SIRT1、PGC-1α表达降低（P<0.01）；但EX-527的介入钝化了益气温阳方对上述信号分子的调节作用（P<0.05,P<0.01）。透射电镜及荧光探针结果表明，模型组鼻黏膜线粒体见大量圆球状线粒体分布，ROS水平显著升高（P<0.01）；益气温阳方干预恢复了线粒体长管状形态并降低ROS水平（P<0.01），而EX-527的介入削弱了上述改善效应（P<0.01）。结论 益气温阳方可通过调控SIRT1以激活PGC-1α，进而抑制Drp1介导的线粒体过度分裂，起到干预AR的效应。SIRT1可能为益气温阳方干预AR的重要靶点之一。

关键词

变应性鼻炎 / 益气温阳方 / SIRT1 / Drp1 / 线粒体动态 / EX-527