膝痹宁Ⅱ方抑制TGF-β/Smad3介导巨噬细胞-肌成纤维细胞的转化改善KOA滑膜纤维化

摘要

目的 探讨膝痹宁Ⅱ方对膝骨关节炎（KOA）大鼠滑膜纤维化的改善作用，并研究其通过TGF-β/Smad3介导巨噬细胞-肌成纤维细胞的转化机制。方法 将25只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、膝痹宁Ⅱ低剂量组、膝痹宁Ⅱ高剂量组以及塞来昔布组，每组5只。前交叉韧带横断术（ACLT）构建KOA模型，ACLT术后第14天开始灌胃干预，给药28 d后提取各组滑膜组织。用Masson和天狼星红染色评估滑膜纤维化程度；Western blot检测各组组织TGF-β、CollagenⅠ、α-SMA蛋白相对表达。采用RAW264.7细胞，并分为空白组、TGF-β组、膝痹宁Ⅱ50 mg·L^-1组、膝痹宁Ⅱ100 mg·L^-1组以及Galunisertib组。免疫荧光双标检测RAW264.7细胞的CD68、α-SMA的表达；流式细胞术检测细胞中共表达CD68和α-SMA的细胞群体；细胞收缩实验检测各组巨噬细胞-肌成纤维细胞的转化情况；Western blot检测各组细胞的TGF-β、p-Smad3、CollagenⅠ、α-SMA的蛋白相对表达；RT-qPCR检测各组细胞的TGF-β、CollagenⅠ、α-SMA的mRNA相对表达。结果 与模型组相比，膝痹宁Ⅱ高剂量组的滑膜纤维化病变减轻，组织中可见大量致密胶原纤维沉积下降（P<0.05,P<0.01）,CollagenⅠ、TGF-β、α-SMA的蛋白相对表达减少（P<0.05,P<0.01）。与TGF-β组相比，膝痹宁Ⅱ100 mg·L^-1组的细胞CD68和α-SMA的共表达减少（P<0.01）,Col?lagenⅠ、TGF-β、α-SMA、p-Smad3的蛋白相对表达减少（P<0.05,P<0.01）,TGF-β、CollagenⅠ、α-SMA的mRNA相对表达减少（P<0.05,P<0.01）；细胞收缩能力减弱（P<0.01）。结论 膝痹宁Ⅱ方能抑制TGF-β/Smad3介导巨噬细胞-肌成纤维细胞的转化改善KOA滑膜纤维化。

关键词

膝骨关节炎 / 滑膜纤维化 / TGF-β/Smad3信号通路 / 巨噬细胞-肌成纤维细胞转化 / 膝痹宁Ⅱ方 / 成纤维样滑膜细胞