冬凌草甲素通过PINK1/Parkin通路诱导三阴性乳腺癌发生线粒体自噬的机制研究

摘要

目的 探讨冬凌草甲素（Oridonin,Ori）对三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer, TNBC）细胞增殖、凋亡和线粒体自噬的影响及具体的作用机制。方法 采用CCK8法探究Ori对TNBC细胞MDA-MB-231活力的影响并确定有效抑制肿瘤细胞生长的药物浓度；流式细胞术检测Ori对细胞凋亡和活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的影响；Western blot测检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Bax和调控线粒体自噬相关蛋白LC3B、p62、PINK1、Parkin的表达；MDC染色法观察药物干预后MDAMB-231细胞是否发生自噬；免疫荧光检测细胞内LC3B、PINK1和Parkin蛋白的表达及其与线粒体共定位；并通过皮下移植瘤动物实验验证Ori对TNBC增殖、自噬的影响。结果 Ori能显著抑制TNBC细胞活力，IC₅₀为20.57μmol·L^-1。同时，20μmol·L^-1Ori能显著促进细胞凋亡（P<0.001），提高细胞中ROS含量（P<0.05）；上调细胞凋亡蛋白Bax的表达（P<0.01），上调活化Caspase-9蛋白表达（P<0.01）。此外，Ori能促进TNBC细胞发生自噬，上调了自噬相关蛋白LC3BⅡ/Ⅰ、p62的表达（P<0.05,P<0.001），并上调线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达（P<0.01）及其与线粒体共定位。皮下移植瘤动物实验证实，与对照组相比，Ori高剂量组能显著抑制肿瘤生长，促进肿瘤细胞发生线粒体自噬。结论 Ori通过PINK1/Parkin通路诱导TNBC发生线粒体自噬，抑制肿瘤生长。

关键词

冬凌草甲素 / 三阴性乳腺癌 / 凋亡 / 自噬 / 线粒体自噬 / PINK1 / Parkin / LC3B