乌拉尔甘草GubHLH基因克隆与原核表达

张艺朦; 付业繁; 赫苯玎; 陈晓芳; 孙欣; 李欣; 方圆

doi:10.13845/j.cnki.issn1673-2995.20240925.001

吉林医药学院学报 ›› 2025, Vol. 46 ›› Issue (01) : 15 -18. DOI: 10.13845/j.cnki.issn1673-2995.20240925.001

乌拉尔甘草GubHLH基因克隆与原核表达

张艺朦, 付业繁, 赫苯玎, 陈晓芳, 孙欣, 李欣, 方圆

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摘要

目的构建乌拉尔甘草基本螺旋-环-螺旋（GubHLH）转录因子的原核表达载体并进行原核表达及鉴定。方法从乌拉尔甘草根中提取总mRNA，反转录得到cDNA后PCR扩增获得GubHLH基因全长，构建原核表达载体pET28a-GubHLH，分析GubHLH表达的最佳IPTG浓度、温度和时间条件。结果获得的重组质粒pET28a-GubHLH在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中的最佳诱导条件为37℃下用0.2 mmol/L的IPTG诱导目的蛋白3 h。结论成功构建GubHLH蛋白原核表达体系，并获得重组质粒pET28a-GubHLH在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中的最佳诱导条件。