铁过载诱导的小鼠肝纤维化过程影响巨噬细胞M2极化

摘要

目的 观察铁过载诱导的小鼠肝纤维化过程中肝内巨噬细胞极化的演变过程。方法 选取32只6～8周龄C57BL/6小鼠，随机分为对照组（n=8）、模型组（n=24）。模型组每日给予外源性右旋糖酐铁（50 mg/kg）制作慢性铁过载诱导的小鼠肝纤维化模型，在造模第3、5、7周分别处死小鼠，随机分为模型第3、5、7周组，8只/组；对照组给予腹腔注射同等剂量的生理盐水。取小鼠肝脏组织进行Masson染色、Sirius Red染色及免疫组织化学染色观察各组小鼠纤维化程度。取血清进行生化分析及比色法检测ALT、AST等观察肝功能。检测血清铁、铁蛋白、肝脏总铁及肝脏亚铁水平观察小鼠肝脏铁过载情况。免疫荧光双标法检测i NOS⁺/F4/80⁺细胞、CD206⁺/F4/80⁺等细胞观察M1、M2型巨噬细胞比例及分布情况。Western blotting法检测Arg-1、i NOS等蛋白表达。ELISA法检测IL-6、IL-10、TNF-α等蛋白水平。RT-PCR法检测CD206等蛋白m RNA表达。结果 与对照组比较，各模型组小鼠汇管区纤维组织增生逐渐加重，肝小叶结构逐渐破坏，逐见假小叶形成。各模型组小鼠α-SMA、COL-1等蛋白表达呈造模时间依赖升高（P<0.01）。各模型组小鼠血清ALT、AST水平升高，血清铁、铁蛋白、肝脏总铁及亚铁含量均升高（P<0.01）。各模型组小鼠M1极化标志物IL-6、TNF-α、i NOS等蛋白表达升高（P<0.01），以第3周为最高。M2极化标志物IL-10、Arg-1蛋白及CD206 m RNA表达与对照组比较在第3周呈升高趋势（P<0.01），第5周、第7周呈下降趋势（P<0.01）。结论 铁过载在各阶段诱导巨噬细胞M1极化增加，在肝纤维化早期可诱导巨噬细胞M2极化增加，而中晚期对M2极化具有负调节的作用。

关键词

铁过载 / 右旋糖酐铁 / 肝纤维化 / 巨噬细胞极化