黑骨藤正丁醇萃取成分治疗大鼠阿尔茨海默病的药效学及作用机制

摘要

目的 探讨黑骨藤正丁醇萃取部位对阿尔茨海默病（AD）的药效学研究及潜在作用机制预测。方法 采用超高效液相-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-QE-MS）技术对黑骨藤正丁醇部位的化学成分进行分析鉴定，建立三氯化铝（AlCl3）和D-半乳糖（D-gal）联合诱导50只SPF级雄性AD大鼠模型，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）、苏木精-伊红染色（HE）和尼氏染色（Nissl）、免疫组化染色（ICH）、Western blotting等实验为基础，通过网络药理学及分子对接技术预测抗AD潜在作用机制。结果黑骨藤正丁醇萃取部位鉴定出17个化学成分，主要包括苯丙素类、黄酮类、蒽醌类、三萜类、甾体类以及挥发油类。药效学实验结果显示经过黑骨藤正丁醇萃取部位组处理后，大鼠海马中乙酰胆碱酯酶（AChE）含量降低（P<0.05），而乙酰胆碱（ACh）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量增加（P<0.05），在Western blotting实验中神经细胞凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达上升（P<0.05），而Bax蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达下降（P<0.01），氧化应激因子核因子红细胞系2相关因子2(Nrf-2)和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达水平上调（P<0.01），氧化应激反应转录因子（Keap-1）蛋白表达水平下调（P<0.01），脑源性神经营养因子BDNF表达水平均升高（P<0.01），以及β-淀粉样蛋白Aβ、Tau蛋白表达水平均下调（P<0.01），且表现出一定的剂量依赖性。黑骨藤正丁醇萃取部位活性成分与AD共获得TNF、AKT1和ESR1等14个关键靶点。结论 初步阐明了黑骨藤正丁醇萃取成分的药效物质基础，并证实了其具有较好的抗AD效果。预测黑骨藤正丁醇萃取部位可通过多组分、多靶点、多途径和多通路发挥抗AD作用。

关键词

UPLC-QE-MS / 黑骨藤 / 正丁醇萃取部位 / 化学成分 / 阿尔茨海默病 / 网络药理学