正肝方对二乙基亚硝胺诱导的肝癌大鼠的抗癌作用及机制：基于激活Hippo/YAP通路

摘要

目的 探讨正肝方通过调控Hippo/YES-相关蛋白同源癌蛋白（YAP）信号通路对二乙基亚硝胺（DEN）诱导的肝癌大鼠模型的抗癌作用及对肝癌潜在的抑制机制。方法 将80只SD大鼠随机分为正常对照组（n=10）、造模组（n=70）。造模组通过连续12周腹腔注射DEN(50 mg/kg)建立肝癌模型。建模成功后，随机分为5组：模型对照组、阳性对照组（槐耳颗粒，4 g/kg）、正肝方低、中、高剂量组（2、4、8 g/kg）,n=10。各组接受相应药物干预，1次/d，持续17周。正常对照组和模型组仅灌喂等量纯水。观察大鼠生存状况和生存率，并测定体质量、肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数。观测大鼠肝脏组织的形态变化。通过HE染色观察组织病理变化。利用免疫组化技术检测组织中YAP及p-YAP的表达水平。Western blotting检测组织中Hippo/YAP通路中YAP、p-YAP、MST1、LATS1和p-LATS1等相关蛋白表达。结果 与正常对照组相比，模型对照组大鼠生存状况较差，生存率降低，体质量、肝脏指数、脾脏指数升高（P<0.01），胸腺指数降低（P<0.05）。正肝方治疗后，肝脏指数、脾脏指数降低（P<0.05），胸腺指数升高（P<0.01）。大鼠肝脏组织形态及HE染色结果表明，模型组肝小叶结构受损，肝细胞排列紊乱，正肝方治疗后这些病理变化得到改善。免疫组化结果显示，与模型对照组相比，在正肝方低、中、高剂量组及阳性对照组中，YAP的阳性表达水平逐渐减弱，且与正肝方的剂量呈负相关（P<0.01）；而p-YAP的阳性表达则逐渐增强（P<0.01），且与正肝方的剂量呈正相关（P<0.01）。Western blotting结果显示，与模型对照组相比，在接受正肝方治疗的各剂量组中，随着药物浓度的增加，YAP蛋白表达水平随着药物剂量的增加而降低（P<0.001）,pYAP的阳性表达水平逐渐升高，尤其在高剂量组中这一变化更为明显（P<0.001）；正肝方各剂量组及槐耳颗粒组治疗组的组织中MST1蛋白表达明显升高（P<0.05）。同时，正肝方用药组的组织中，LATS1和p-LATS1蛋白的水平也明显升高，且与正肝方的剂量呈正相关。结论 正肝方可以通过调节激活Hippo信号通路的关键蛋白，上调MST1蛋白表达，激活LATS1，活化的LATS1进而调控下游靶点YAP表达，将其磷酸化，降低其含量，从而抑制到肝癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡的作用。

关键词

正肝方 / 肝癌 / Hippo/YAP通路 / 作用机制 / 二乙基亚硝胺