抵当汤含药血清通过PI3K/Akt/mTOR信号通路增强高糖诱导的大鼠肾小球内皮细胞自噬

摘要

目的 观察抵当汤含药血清通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR信号通路对高糖诱导的大鼠肾小球内皮细胞（RGECs）自噬的影响，以期为糖尿病肾病（DN）的治疗提供新的思路。方法 连续过筛法结合胶原酶法提取与培养原代RGECs，使用第Ⅷ因子免疫荧光法对其鉴定。通过高糖培养基诱导RGECs模拟糖尿病环境下的细胞状态。将细胞分为5组：空白组（正常培养的RGECs）、高糖模型组（使用高糖培养基诱导的RGECs）、抵当汤组（在高糖诱导基础上加入抵当汤含药血清进行干预的RGECs）、3-MA组（在高糖诱导基础上加入自噬抑制剂3-MA进行干预的RGECs）和抵当汤+3-MA干预组（在高糖诱导基础上同时加入抵当汤含药血清和自噬抑制剂3-MA进行干预的RGECs）。CCK-8法筛选最佳造模条件和含药血清干预浓度，利用单丹磺酰卡巴胺（MDC）法观察自噬囊泡荧光强度，RT-qPCR法检测Beclin-1、p62mRNA表达，Western blotting法检测p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Beclin-1、p62、LC3B蛋白表达水平。结果 与正常组比较，高糖模型组RGECs自噬荧光信号减少，荧光强度降低，Beclin-1 mRNA表达减少，p62 mRNA表达升高，Beclin-1蛋白表达和LC3Ⅱ/Ⅰ水平下降，P62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达上升（P<0.01）；与高糖模型组比较，抵当汤组RGECs自噬荧光面积与强度明显升高，Beclin-1 mRNA表达上升，p62 mRNA表达下降，Beclin-1蛋白表达上升，p62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达下降（P<0.01）。结论 抵当汤含药血清可通过部分调节PI3K/Akt/mTOR信号通路，增强RGECs的自噬，为糖尿病肾病的治疗提供新策略。

关键词

糖尿病肾病 / 抵当汤 / 自噬 / PI3K/Akt/mTOR信号通路 / 肾小球内皮细胞