C6TSEDRVAJZ小分子化合物组合诱导人胎盘成纤维细胞分化为上皮样细胞

摘要

目的 利用小分子化合物组合将人胎盘成纤维细胞（HPFs）重编程为化学诱导上皮样细胞（ciEP-Ls）。方法 常氧条件下培养HPFs细胞，通过免疫荧光、PCR和染色体核型分析鉴定HPFs。生理性低氧条件下（37 ℃，5%O₂）,HPFs在含有小分子化合物C6TSEDRVAJZ（CHIR99021、616452、TTNPB、SAG、EPZ5676、DZNep、Ruxolitinib、VTP50469、Afuresertib、JNK-IN-8、EZM0414）的培养基中进行诱导，诱导期间每日定时观察细胞形态。通过免疫荧光法、Western blotting 和 PCR 技术检测上皮细胞标志物的表达水平。对诱导细胞进行染色体核型分析，并计算诱导效率。结果 HPFs免疫荧光结果显示，表达成纤维表面标记物CD34和Vimentin，不表达上皮表面标志物；PCR结果显示，成纤维特异性基因S100A4、COL1A1高表达，且具有人正常二倍体核型。在低氧条件下诱导1 d后，部分HPFs细胞形态发生改变，由多突的纺锤形变成圆形或多边形，具有ciEP-Ls形态特征。诱导处理完成第 4天，免疫荧光和Western blotting结果显示，诱导细胞能够高表达上皮细胞特征性标志物 E-Cadherin和Lin28A（P<0.05）。PCR 结果表明，细胞显著表达上皮标志物 Smad3,GLi3,PAX8,WT1,KRT19 和 KRT18，而成纤维细胞表面标记物表达均下调，且诱导细胞具有人正常二倍体核型，HPFs重编程效率为（64.53±2.80）%～（68.10±3.60）%。结论 小分子组合C6TSEDRVAJZ 在低氧条件下成功将 HPFs 诱导为 ciEP-Ls，且具有较高的诱导效率。

关键词

化学重编程 / 小分子诱导 / 成纤维细胞 / 上皮样细胞