凉血解毒化瘀方通过抑制cGAS-STING通路治疗小鼠慢加急性肝衰竭

摘要

目的 基于cGAS-STING信号通路，研究中药凉血解毒化瘀方（LXJDHYF）治疗小鼠慢加急性肝衰竭（ACLF）的可能作用机制。方法 30只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、凉血解毒化瘀方高剂量组、凉血解毒化瘀方低剂量组及cGASSTING信号通路特异性抑制剂H151组，6只/组。除空白组外其余各组采用CCl₄诱导形成肝硬化，后予以脂多糖联合D-氨基半乳糖腹腔注射急性攻击形成ACLF小鼠模型。取小鼠肝组织进行HE以及TUNEL染色，生化法测定血清ALT、AST及TBil水平以检测凉血解毒化瘀方对小鼠肝功能的影响。同时采用RT-qPCR测定凉血解毒化瘀方对小鼠骨髓巨噬细胞（BMDMs）β干扰素（IFN-β）、干扰素刺激基因15（ISG15）、白细胞介素6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达水平的影响；Western blotting分析凉血解毒化瘀方对BMDMs干扰素调节因子3（IRF3）及干扰素基因刺激因子（STING）蛋白磷酸化水平的影响；结合RT-qPCR检测ACLF小鼠肝组织中上述mRNA表达水平以及ELISA法检测ACLF小鼠血清IL-6及TNF-α水平以观察凉血解毒化瘀方对cGAS-STING信号通路的作用。结果 HE染色显示，凉血解毒化瘀方组肝细胞坏死及炎症浸润程度与模型组相比较轻，TUNEL染色提示凉血解毒化瘀方组凋亡阳性细胞比例低于模型组（P<0.001）。凉血解毒化瘀方组血清ALT、AST及TBil水平均低于模型组（P<0.001）。RT-qPCR结果表明凉血解毒化瘀方能抑制BMDMs及小鼠肝组织IFN-β、ISG15、IL-6及TNF-α的mRNA表达（P<0.05）,Western blotting结果显示随着凉血解毒化瘀方给药剂量增加，BMDMs细胞中IRF3及STING蛋白磷酸化水平降低（P<0.05），凉血解毒化瘀方组血清IL-6及TNF-α水平均低于模型组（P<0.05）。结论 凉血解毒化瘀方能够改善ACLF小鼠肝功能，降低小鼠血清促炎细胞因子水平，其机制可能与抑制cGAS-STING通路过度激活有关。

关键词

慢加急性肝衰竭 / cGAS-STING信号通路 / β干扰素 / 干扰素刺激基因15 / 凉血解毒化瘀方