AKBA联合阿霉素抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和裸鼠移植瘤生长

摘要

目的 探究AKBA联合阿霉素对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231在增殖、迁移、侵袭和凋亡上的协同抑制作用，并通过网络药理学分析AKBA作用乳腺癌的下游信号通路。方法 MDA-MB-231细胞体外培养，CCK-8法分别检测AKBA和阿霉素（ADR）作用MDA-MB-231细胞48 h的半抑制浓度（IC50）,Synergy Finder在线网站（https：//synergyfinder.fimm.fi）分析AKBA联合阿霉素的协同指数和最佳协同浓度。设置实验分组，对照组：MDA-MB-231正常培养；AKBA组：MDA-MB-231+AKBA(22.5μmol/L)处理48 h;ADR组：MDA-MB-231+(0.84μmol/L)处理48 h;AKBA+ADR组：MDA-MB-231+AKBA(22.5μmol/L)+ADR(0.84μmol/L)处理48 h，使用克隆形成实验、Transwell迁移和侵袭、划痕实验检测AKBA联合阿霉素抑制细胞迁移和侵袭的能力，采用Western blotting和q PCR实验检测凋亡相关基因的表达情况，将4～5周龄Balb/c nude小鼠随机分为4组（6只/组），建立裸鼠异种移植瘤模型，对照组：腹腔注射200μL 0.9%生理盐水；AKBA组：腹腔注射200μL50 mg/kg的AKBA;ADR组：腹腔注射200μL 2.5 mg/kg的ADR;AKBA+ADR组：腹腔注射200μL50 mg/kg的AKBA和2.5 mg/kg的ADR等量混合溶液，检测各组抑瘤率，HE染色检测组织病理情况，并通过网络药理学分析预测AKBA作用于乳腺癌的下游靶点和信号通路。结果 AKBA对MDA-MB-231细胞作用48 h的IC50为45.15±0.97μmol/L,ADR的IC50为0.42±0.99μmol/L;Synergy Finder证实AKBA与ADR联合具有协同作用（ZIP>10）；相较于对照组、AKBA组和阿霉素组，AKBA+ADR组明显抑制TNBC细胞增殖活性（P<0.0001），集落形成数量减少更多（P<0.05）；相较对照组、AKBA和ADR组，AKBA+ADR组明显减弱细胞划痕愈合率（P<0.01）；较对照组、AKBA组和ADR组，AKBA+ADR组所致细胞迁移至下室的数量减少更多（P<0.01）；与对照组和AKBA或ADR单独使用相比，AKBA+ADR组抑制MDA-MB-231细胞侵袭基质胶能力增强（P<0.05）；较AKBA或ADR单独作用，AKBA+ADR组在m RNA和蛋白水平上调Bax、Caspase-3剪切体和下调Bcl-2的表达更多（P<0.05）;AKBA组、ADR组和AKBA+ADR组的抑瘤率分别为23.80%、52.73%和81.83%(P<0.01),AKBA+ADR组相比于ADR组对小鼠脏器造成的毒性损伤更小；网络药理学预测AKBA通过PTGS2影响乳腺癌进展。结论 AKBA联合阿霉素能够显著抑制TNBC细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭，并促进细胞凋亡，在裸鼠体内抑制移植瘤生长并减轻阿霉素的毒性作用。

关键词

AKBA / 乙酰基-11-酮基-β-乳香酸 / 三阴性乳腺癌 / 阿霉素