芪黄健脾滋肾颗粒可改善小鼠系统性红斑狼疮血小板减少:基于Ca²⁺/CaMKK2/AMPK/mTOR信号通路介导的自噬

摘要

目的 基于Ca²⁺/Ca MMK2/AMPK/mTOR信号通路介导的自噬探讨芪黄健脾滋肾颗粒（QJZG）对小鼠系统性红斑狼疮血小板减少的影响。方法 将24只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组、QJZG组、醋酸泼尼松（Pred）组、Ca MKK2激活剂组，6只/组；另将6只C57BL/6小鼠设为正常对照（Control）组。Control组、模型组：予10 m L/（kg·d）生理盐水灌胃；QJZG组：芪黄健脾滋肾颗粒+生理盐水配成0.39 g/m L溶液灌胃，剂量3.9 g/（kg·d）;Pred组：予小鼠醋酸泼尼松片加生理盐水配成0.273 mg/m L的溶液灌胃，剂量2.73 mg/（kg·d）；激活剂组：予10 m L/（kg·d）生理盐水灌胃，另将小鼠腹腔注射Ca MKK2激活剂，5 mg/kg,2次/周。检测血小板计数（PLT）、血小板压积（PCT）、血小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）;ELISA法检测血清血小板生成素（TPO）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）水平；流式细胞术检测钙离子荧光强度；Real-time PCR法检测血小板Ca MKK2、AMPK2α、mTOR、Beclin1、p62 m RNA表达水平；Western blotting检测血小板Ca MKK2、p-Ca MKK2、AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、LC3、Beclin1、P62蛋白表达水平。结果 与Control组相比，模型组PLT、PCT、IL-10、mTOR、p62m RNA、p-mTOR、P62水平降低（P<0.01）,PDW、MPV、TPO、IL-6、TNF-α、IFN-γ、Ca MKK2、AMPK、Bcl-1 m RNA、p-Ca MKK2、p-AMPK及血小板自噬蛋白（LC3Ⅱ蛋白、Beclin1蛋白）在血小板内表达量升高（P<0.01）。与模型组比较，QJZG组及Pred组PLT、IL-10、mTOR、p62 m RNA、p-mTOR、P62水平升高（P<0.01）,MPV、TPO、IL-6、TNF-α、IFN-γ、Ca MKK2、AMPK、Bcl-1 m RNA、p-Ca MKK2、p-AMPK及血小板自噬蛋白（LC3Ⅱ蛋白、Beclin1蛋白）在血小板内表达量降低（P<0.05）;Ca MKK2激活剂组PLT、PCT、IL-10、mTOR、p62 m RNA、p-mTOR、P62水平降低（P<0.01）,PDW、MPV、IL-6、TNF-α、IFN-γ、Ca MKK2、AMPK、Bcl-1 m RNA、p-Ca MKK2、p-AMPK及血小板自噬蛋白（LC3Ⅱ蛋白、Beclin1蛋白）在血小板内表达量升高（P<0.01）。结论 QJZG可通过减轻炎症及影响Ca2+/Ca MKK2/AMPK/mTOR信号通路抑制血小板自噬改善系统性红斑狼疮血小板减少。

关键词

芪黄健脾滋肾颗粒 / 系统性红斑狼疮 / 血小板自噬 / Ca～(2+)/CaMKK2/AMPK/mTOR信号通路