铁死亡诱导剂Erastin下调ACSL4抑制肝癌细胞体外增殖

摘要

目的 分析酯酰辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)在肝癌中的表达，探究铁死亡调控ACSL4对癌细胞增殖能力的影响。方法 收集肝癌和癌旁正常肝组织临床样本，HE染色病理学鉴定后，微量法检测丙二醛（MDA）含量，RT-qPCR检测ACSL4与增殖细胞核抗原（PCNA）的mRNA表达，Western blotting检测ACSL4与PCNA的蛋白表达。体外培养Huh-7人肝癌细胞，先分为3组：即铁死亡诱导剂Erastin组、抑制剂Fer-1组、以及Erastin与Fer-1联合作用组；其中Erastin或Fer-1组均包含0、20、40、60、80、100μmol/L共6个浓度，然后采用筛选的Erastin浓度80μmol/L+(0、30、60、90μmol/L)Fer-1，筛选Fer-1浓度后再分为3组：对照组、80μmol/L Erastin单独处理组、80μmol/L Erastin+60μmol/L Fer-1联合处理组，均作用48 h。干预ACSL4、PCNA的表达后，平板克隆实验检测细胞增殖能力的改变，微量法检测MDA含量的变化。结果 相较于癌旁正常肝组织，肝癌组织中MDA含量降低（P<0.01）,ACSL4、PCNA的mRNA和蛋白表达均显著增强（P<0.05）;Erastin可抑制ACSL4、PCNA的mRNA和蛋白表达（P<0.01），并抑制细胞增殖（P<0.001）、上调MDA含量（P<0.01）；单独使用Fer-1对细胞存活率无影响；但加入Erastin后再应用Fer-1，则可逆转Erastin对ACSL4、PCNA表达（P<0.05），细胞增殖能力的抑制（P<0.001）,MDA含量的上调（P<0.05）。结论 ACSL4在肝癌中表达增强，Erastin可提高MDA含量、下调ACSL4表达，诱导肝癌细胞铁死亡，抑制癌细胞增殖；Fer-1则可逆转Erastin的上述作用。

关键词

肝癌 / 细胞增殖 / Erastin / ACSL4 / 铁死亡