顺铂诱导TNF-α自分泌引发头颈部鳞状癌细胞RIP1/RIP3/MLKL的坏死性凋亡

摘要

目的 探讨顺铂是否能够诱导头颈部鳞状癌细胞产生TNF-α，进而激活RIP1/RIP3/MLKL依赖性的坏死性凋亡通路，抑制鳞癌细胞的增殖，并探讨其分子机制。方法 选取头颈部鳞状癌细胞系HN4和SCC4作为实验对象，分为对照组、顺铂组、caspases抑制组、坏死性凋亡抑制组。利用CCK-8法检测顺铂刺激后24 h的细胞存活率。随后采用Western blotting检测caspase-8以及坏死性凋亡通路蛋白（RIP1/RIP3/MLKL）和NF-κB（p65）、TNF-α表达情况；结合细胞划痕实验和Western blotting检测上皮间充质转化相关蛋白（N-cadherin、Vimentin、E-cadherin）的表达情况，评估坏死性凋亡对头颈部鳞状癌细胞迁移能力的影响。结果 顺铂对HN4、SCC4细胞毒性IC₅₀分别约为10μg/m L、15μg/m L。在顺铂刺激下，与坏死性凋亡抑制剂组相比，caspase-8表达降低（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin表达降低（P<0.05）、E-cadherin表达升高（P<0.05），坏死性凋亡通路蛋白（RIP1/RIP3/MLKL）表达升高（P<0.05）,TNF-α和NF-κB（p65）蛋白表达均升高（P<0.05）。在顺铂组中，细胞愈合率显著降低于对照组和坏死性凋亡抑制剂组。结论 顺铂作用可激活头颈部鳞状癌细胞NF-κB信号通路，并促进TNF-α自分泌，从而引发鳞癌细胞经由RIP1/RIP3/MLKL通路依赖性的坏死性凋亡反应，并抑制肿瘤细胞性增殖。

关键词

头颈部鳞状癌细胞 / 顺铂 / z-VAD-fmk / 坏死性凋亡 / Nec-1