原代大鼠主动脉血管干细胞的体外培养扩增及鉴定

摘要

目的 采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞，为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法 无菌分离2～3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉，切成长约2.0 mm的血管节段，均匀种瓶，经外膜贴壁固化后进行原代培养，待细胞生长融合度达80%～90%时传代。镜下观察细胞形态及其生长特性，采用流式细胞仪分析目的细胞表面标志物CD分子表达情况，成脂、成骨诱导分化实验检测其多向分化潜能。结果 接种3 d后，少量梭形、星形或多角形的细胞从血管节段周围爬出；5～6 d后形成岛屿状细胞集落，细胞增殖迅速，呈放射状向外扩大，并出现细胞克隆现象；7～8 d后细胞融合成片，呈涡旋状分布；传至第3代后，细胞匀质性较高，表现为典型的“成纤维样”排列生长。流式细胞仪分析细胞主要表达CD44、CD73、CD90，阳性率分别为80.3%、62.2%、46.8%；低表达CD34、CD45、CD11b/c，阳性率分别为1.1%、0.2%、0.2%。体外诱导分化实验表明目的细胞具有成脂、成骨分化潜能。结论 “切段外膜贴壁培养法”可成功分离培养出具有间充质干细胞特性的大鼠主动脉血管干细胞。

关键词

血管干细胞 / 主动脉 / 切段外膜贴壁培养法 / 原代培养 / 免疫表型 / 分化潜能 / 血管重构