槲皮素通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制小鼠成纤维细胞焦亡

摘要

目的 探究槲皮素通过NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路调控小鼠成纤维细胞（NIH-3T3）焦亡的影响及其机制。方法 实验分为对照（Control）组、模型（Model）组、槲皮素（HPS）组、NLRP3特异性抑制剂（MCC950）组。CCK-8法检测槲皮素对NIH-3T3细胞活力的影响。光镜下观察细胞形态变化，ELISA检测白细胞介素（IL）-18、IL-1β含量，Western blotting和qRT-PCR检测NLRP3、活化半胱氨酸蛋白酶1(Cleaved caspase-1)、GSDMD-N蛋白表达及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA水平。TUNEL染色及乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞焦亡情况。结果 槲皮素作用于NIH-3T3细胞最佳干预浓度和时间分别是20μmol/L和24 h。与Control组相比，Model组细胞出现明显肿胀、破裂、细胞内容物流出，IL-18、IL-1β含量和NLRP3、Cleaved caspase-1、GSDMD-N蛋白表达及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA水平均明显升高（P<0.001,P<0.0001）,TUNEL染色的阳性细胞数及LDH释放量增加（P<0.0001）。与Model组相比，HPS组和MCC950组细胞焦亡情况改善，IL-18、IL-1β含量和NLRP3、Cleaved caspase-1、GSDMD-N蛋白表达及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA水平显著降低（P<0.01,P<0.001）,TUNEL染色阳性细胞数及LDH释放量明显减少（P<0.0001）。结论 槲皮素可能通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制成纤维细胞焦亡，下调炎症因子释放从而发挥治疗作用。

关键词

槲皮素 / 细胞焦亡 / NLRP3 / 成纤维细胞