IL-21和CCL19修饰可提高NKP30 CAR-T细胞对肺癌的杀伤效率并促进其肿瘤浸润

摘要

目的 探讨细胞因子IL-21和趋化因子CCL19修饰的NKP30 CAR-T细胞是否增强对肺癌的杀伤和浸润作用。方法 在NKP30 CAR基础上融合基因IL-21和CCL19构建IL-21-CCL19 NKP30 CAR;CAR-T细胞的培养使用CD3CD28单抗及细胞因子IL-2刺激；流式细胞术检测免疫细胞表型；迁移实验检测IL-21对免疫细胞的迁移作用；乳酸脱氢酶（LDH）及成球实验检测CAR-T细胞的杀伤及浸润能力；酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测IFN-γ的分泌数量；ELISA检测IL-21及CCL19的分泌情况；体内实验中，将肿瘤细胞显微注射到斑马鱼卵黄囊，构建斑马鱼移植瘤模型，24 h后将免疫细胞注射至同样部位，体式荧光显微镜拍摄荧光。结果 NKP30配体（B7H6）在正常组织及血液细胞不表达，在肺癌细胞上高表达（90%以上）。IL-21-CCL19 NKP30CAR-T细胞与NKP30 CAR-T细胞和常规T细胞相比，具有更强的增殖能力、迁移能力及中心记忆T细胞的形成（P<0.001），免疫抑制分子CTLA4与PD1显著降低（P<0.005），对肺癌细胞具有更强的杀伤能力（P<0.001），伴随IFN-γ数量明显增加（P<0.001）。IL-21-CCL19 CAR-T细胞杀伤肺癌细胞中产生大量细胞因子IL-21 (3152.33±526.74 pg/mL)和趋化因子CCL19(1853±211.95 pg/mL)。体内实验中，CAR-T细胞和普通T细胞比较，具有较强的杀伤能力和增殖能力，但2种CAR-T细胞无明显差异（P>0.05）。结论 IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞更容易浸润到肿瘤内部，有效杀伤肿瘤细胞，同时产生更多的记忆T细胞。

关键词

肺癌 / NKP30 / 嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞 / IL-21 / CCL19