RgpB通过抑制自噬小体与溶酶体融合避免Cx43降解参与食管癌化疗耐药

摘要

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌（Pg）的毒力因子RgpB在食管鳞癌化疗耐药中的作用机制。方法 采用免疫沉淀-质谱联用技术筛选与Pg的毒力因子RgpB互作的自噬调节因子；运用免疫共沉淀实验探索RgpB和自噬调节因子TBC1D5之间的相互作用；采用蛋白免疫印迹法测定Pg感染对食管癌细胞膜受体分子Cx43表达的影响；使用细胞免疫荧光检测Lamp1、Cx43与TBC1D5的关系；利用自噬双荧光观察Pg感染对自噬小体与溶酶体融合的影响；使用平板克隆及CCK-8法检测Pg感染及Cx43抑制剂在使用化疗药后对食管癌细胞系增殖作用的影响。结果 免疫沉淀-质谱联用技术筛选出与RgpB互作的自噬调节因子TBC1D5；免疫共沉淀结果显示，Pg分泌的毒力因子RgpB可与自噬调节因子TBC1D5直接结合并相互作用；蛋白免疫印迹法结果显示，感染Pg后食管癌细胞膜Cx43表达量高于未感染组（P<0.05）；细胞免疫荧光结果显示，在感染Pg后，Cx43在细胞膜表面的表达量增加（P<0.05）;stubRFP-sensGFP-LC3自噬双荧光结果显示，在Pg感染时，自噬体与溶酶体融合受到阻断；平板克隆及CCK-8法结果显示，使用化疗药后，Cx43抑制剂能够逆转Pg感染对食管癌细胞系的促进作用。结论 Pg入侵食管癌，其毒力因子RgpB阻碍自噬小体与溶酶体融合，从而使膜受体分子Cx43免受溶酶体降解，导致食管癌化疗耐药。

关键词

食管鳞状细胞癌 / 牙龈卟啉单胞菌 / RgpB / Cx43 / 化疗耐药