血小板特异性Rictor敲除抑制小鼠血小板生成和活化及血栓形成

摘要

目的 探究Rictor对血小板活化和血栓形成的影响。方法 利用PF4-Cre、Rictorfl/fl转基因小鼠，构建血小板特异性Rictor敲除小鼠和野生型小鼠，分别设为敲除组和对照组（总实验小鼠n=65），用于后续实验。Western blotting检测小鼠Rictor蛋白、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT的表达水平。血常规检测敲除和对照组小鼠血小板数目。尾静脉出血实验检测敲除和对照小鼠止血功能。构建静脉血栓模型检测Rictor敲除对血栓形成的影响。使用ADP和凝血酶刺激血小板，检测Rictor敲除对血小板聚集的影响。流式细胞术分析敲除组和对照组血小板在静息态和活化态整合素αIIbβ3与CD62P的表达水平。检测血浆中PF4水平。vWF免疫组化标记巨核细胞。用APC-CD41抗体孵育敲除和对照小鼠的巨核细胞，流式细胞术检测细胞倍体。扫描电镜检测敲除和对照组血小板在胶原表面的伸展变化。结果 与对照小鼠相比，血小板Rictor特异性敲除小鼠AKT磷酸化降低（P<0.001），血小板生成减少（P<0.05），血栓形成受到抑制（P<0.05），血小板对ADP和凝血酶刺激的活化水平降低（P<0.01）,P-选择素蛋白表达水平（P<0.05）、整合素αIIbβ3活化程度（P<0.01）受到抑制，血小板伸展受到抑制（P<0.01）,PF4的血浆含量降低（P<0.05），骨髓中巨核细胞数量减少（P<0.01），倍体降低（P<0.05），前血小板平均面积减少（P<0.01）。结论 血小板特异性敲除Rictor抑制血小板生成和活化，进而减少血栓形成。抑制mTORC2活性可能是一种潜在的抗血栓靶标。

关键词

Rictor / 血小板 / 血栓形成