ORY-1001靶向赖氨酸特异性去甲基化酶1下调胶质母细胞瘤Notch/HES1通路的表达并发挥抗肿瘤作用

摘要

目的 探究赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)抑制剂ORY-1001对胶质母细胞瘤（GBM）的抑瘤作用和机制。方法 从公开数据库（TCGA和HPA）下载相关数据，分析LSD1在GBM和正常脑中的表达情况。将24只雌性BALB/c小鼠，随机分为对照组与ORY-1001组，12只/组。肿瘤细胞种植后，每7 d用400μg/kg ORY-1001进行灌胃，检测肿瘤生长和动物生存时间，评估ORY-1001对GBM的抗肿瘤效应。检测A490 nm值测定ORY-1001对GBM细胞活力的影响。Western blotting检测ORY-1001对LSD1表达的影响。利用慢病毒试剂，构建稳定敲降LSD1的GBM细胞（sh-LSD1），并通过动物成瘤实验评估沉默LSD1在活体动物内的作用以检测LSD1药物抑制获得的表型特异性。运用生物信息学方法分析与LSD1相关的基因及通路。Western blotting检测沉默LSD1及不同剂量ORY-1001治疗后Notch/HES1通路的表达。通过慢病毒转染，构建稳定过表达Notch1(oeNotch1)的U87细胞。测定过表达Notch1后，ORY-1001对GBM动物模型肿瘤生长及生存时间的影响。通过ChIP揭示ORY-1001对Notch/HES1通路的具体调控机制。结果 LSD1在GBM中高表达，并与患者的预后呈负相关（P<0.001）。ORY-1001治疗以及LSD1基因沉默都使荷瘤动物肿瘤负荷减轻（P<0.05）和生存时间延长（P<0.001），对多种GBM细胞的活力均表现出抑制作用（P<0.05）。ORY-1001呈剂量依赖性地抑制LSD1的表达。Notch通路富集了与LSD1抑制相关的差异基因，LSD1沉默及ORY-1001治疗后Notch/HES1通路表达显著下调（P<0.05），逆转了ORY-1001对GBM的抗肿瘤作用（P<0.05）。结论 ORY-1001通过抑制GBM中LSD1的表达而下调Notch/HES1通路，并发挥抗肿瘤效应。

关键词

赖氨酸特异性去甲基化酶1 / 生信分析 / 胶质母细胞瘤 / Notch/HES1通路 / 癌症治疗