茵陈蒿汤治疗肝纤维化的核心功能成分群以及潜在通路

摘要

目的 基于网络药理学和体外实验分析验证茵陈蒿汤（YCHD）治疗肝纤维化（HF）的核心功能成分群（CFCG）以及潜在通路。方法 在DisGeNET、Genecards、CMGRN和PTHGRN提取了HF的PPI数据，使用Cytoscape 3.9.1构建权重网络。从TCMSP中收集茵陈蒿汤所有化学成分，用PreADMET Web服务器和SwissTargetPrediction选择茵陈蒿汤潜在活性成分和靶点。构建融合模型获取功能效应空间并评估有效蛋白，得到CFCG，再进一步对所有目标进行GO和KEGG通路富集分析。细胞实验：体外培养人肝星状细胞（LX-2），分别设置空白组（不加TGF-β1刺激）、对照组NC(20 ng/mL TGF-β1刺激)和化合物组（0、50、100、200μmol/L）,CCK-8实验检测药物敏感性，qPCR实验检测化合物对LX-2中Ⅰ型胶原Α1(COL1A1)的影响，Western blotting实验分析评估化合物在TGF-β1刺激下对LX-2中潜在通路的影响，验证潜在治疗机制。结果 分析得到1005个致病基因，茵陈蒿汤潜在活性成分和靶点分别有226个和1529个，核心功能成分群有52个。根据模型计算结果，选取得分最高的乙酸苄酯、香草酸、苯甲酸甲酯、虎杖苷、月桂酸、阿魏酸进行CCK-8验证发现在200μmol/L内无细胞毒性；在qPCR实验中，与TGF-β1组相比苯甲酸甲酯、虎杖苷、月桂酸和阿魏酸能够抑制TGF-β1诱导的LX-2活化。GO和KEGG分析及Western blotting验证发现，这4种成分在200μmol/L浓度时对PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK、P38 MAPK、p-P38 MAPK有不同程度的抑制。结论 茵陈蒿汤抗肝纤维化可能是其中的乙酸苄酯、香草酸、苯甲酸甲酯、虎杖苷、月桂酸、阿魏酸等成分通过抑制PI3K-AKT和MAPK通路实现的。

关键词

茵陈蒿汤 / 核心功能成分群 / 网络药理学 / 成分贡献率 / 肝纤维化 / LX-2细胞