肿瘤相关成纤维细胞上调hsa-miR-18b-5p靶向FBXL3促进前列腺癌的增殖及转移

摘要

目的 探讨受肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）调控的hsa-miR-18b-5p在前列腺癌（PCa）中的表达水平及作用，并研究对其在PCa发生发展过程中的分子机制。方法 利用生物信息学技术分析在PCa中高表达的miRNA，构建肿瘤相关成纤维细胞并与PCa细胞系共培养，验证CAFs对PCa细胞增殖和迁移的影响及对hsa-miR-18b-5p的调控作用；RT-qPCR验证20例患者癌组织及癌旁正常组织、前列腺正常上皮增生细胞及PCa各细胞系中hsa-miR-18b-5p的表达水平；通过脂质体法将阴性对照及hsamiR-18b-5p抑制物分别转染入PCa细胞C4-2、LNCAP中，分为NC inhibitor组和hsa-miR-18b-5p inhibitor组；采用细胞集落形成、CCK-8实验、划痕愈合、Transwell、IC₅₀实验、流式细胞术分别检测C4-2、LNCAP细胞增殖、迁移、侵袭、耐药能力、凋亡和周期；建立PCa裸鼠移植瘤模型，定期测量移植瘤的质量和体积，Kaplan-Meier生存曲线分析裸鼠生存情况；利用靶基因预测分析网站（Targetscan、Mirtarbase、miRDB、miRDIP）预测has-miR-18b-5p的靶基因，并通过双荧光素酶报告基因分析验证hsa-miR-18b-5p与靶基因的靶向关系，RT-qPCR、Western blotting检测各组细胞靶基因的表达水平。结果 生物信息学分析结果显示，在PCa中高表达的miRNA有17个，结合差异表达程度以及相关文献筛选出拟研究的基因：miR-148a、miR-17、miR-18b-5p、miR-770、miR-297-3p。CAFs与PCa细胞系共培养后hsa-miR-18b-5p的表达水平升高（P<0.01），且促进PCa细胞的增殖与迁移（P<0.01），敲除has-miR-18b-5p可抵消CAFs对PCa细胞增殖及迁移的影响，确定has-miR-18b-5p为研究基因。与正常前列腺上皮细胞或肿瘤旁组织相比，PCa细胞或肿瘤组织中hsa-miR-18b-5p的表达升高（P<0.05）；敲除hsa-miR-18b-5p可抑制C4-2、LNCAP细胞的增殖、迁移、侵袭以及耐药（P<0.05）；敲除hsa-miR-18b-5p可抑制裸鼠移植瘤质量和体积的增长，增加裸鼠的生存时间（P<0.05）。靶基因预测分析网站显示，FBXL3是hsa-miR-18b-5p的一个潜在作用靶点，双荧光素酶报告基因证实has-miR-18b-5p与FBXL3基因间存在结合位点，且敲除hsa-miR-18b-5p可增加C4-2、LNCAP细胞中FBXL3的蛋白表达（P<0.05）。结论 CAFs上调前列腺癌细胞hsa-miR-18b-5p的表达水平，后者可能通过靶向调控FBXL3基因的表达促进PCa细胞的增殖和转移。

关键词

hsa-miR-18b-5p / 肿瘤相关成纤维细胞 / FBXL3 / 前列腺癌 / 促癌